發(fā)布時(shí)間：2021-07-26 14:49

　　目的:檢測(cè)IGF-1/IGF-1R自分泌環(huán)路在NK/T細(xì)胞淋巴瘤（NK/TCL）細(xì)胞株中的表達(dá),探討IGF-1/IGF-1R信號(hào)通路對(duì)NK/TCL細(xì)胞遷移和侵襲的影響及機(jī)制。方法:利用RT-PCR及免疫熒光技術(shù)檢測(cè)IGF-1/IGF-1R的表達(dá),蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)IGF-1R及其下游通路激酶ERK1/2、AKT、JNK、p38的磷酸化水平,transwell技術(shù)觀察IGF-1/IGF-1R自分泌環(huán)路及下游信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。ELISA法檢測(cè)IGF-1/IGF-1R自分泌環(huán)對(duì)細(xì)胞MMP-2、MMP-9、TIMP1分泌水平的影響。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)所用三株NK/TCL細(xì)胞株SNK-1、SNK-6和SNT-8中,前兩者共表達(dá)IGF-1/IGF-1R,其共表達(dá)特征具有腫瘤特異性,而SNT-8缺乏IGF-1R表達(dá)無(wú)法形成自分泌環(huán)路。自分泌的IGF-1可引起其受體相關(guān)的酪氨酸激酶活化進(jìn)而激活其下游AKT及ERK1/2信號(hào)傳導(dǎo),AKT通路的活化可顯著影響細(xì)胞遷移及侵襲能力,同時(shí)IGF-1R可通過(guò)調(diào)控MMP-2、MMP-9的分泌增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞基質(zhì)降解能力,促進(jìn)侵襲。小分子IGF-1R抑制劑可通過(guò)... 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RT-PCR檢測(cè)IGF-1及IGF-1R基因在NK/TCL中的表達(dá)Fig1.1ExpressionofIGF-1andIGF-1RmRNAsinNK/TCLcellsbyRT-PCRassay

圖 1.2 IGF-1/IGF-1R 在 NK/TCL 細(xì)胞株中的表達(dá)Fig 1.2 Detection of IGF-1 and IGF-1R protein in NK/TCL cell lines.2．IGF-1/IGF-1R 自分泌環(huán)路具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性2.1 自分泌性 IGF-1 可誘導(dǎo) IGF-1R 磷酸化為明確 NK/TCL 細(xì)胞中自分泌性 IGF-1 能否誘導(dǎo) IGF-1R 磷酸化，我們利用蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè) IGF-1R 磷酸化水平。在未予任何外源性藥物的情況下，表達(dá) IGF-1R 的細(xì)胞株 SNK-1、SNK-6 均存在受體基礎(chǔ)水平磷酸化。暴露于外源性IGF-1（250ng/mL）后 15 分鐘，磷酸化的 IGF-1R 較基礎(chǔ)狀態(tài)顯著升高。而分別給予 IGF-1R 選擇性抑制劑 OSI-906（1μ M）和 GSK1904529A(1μ M)后，基礎(chǔ)狀態(tài)及再加入外源 IGF-1 刺激后的 IGF-1R 磷酸化水平均受顯著抑制。蛋白印跡試

圖 2.1 蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè) IGF-1R 及 p-IGF-1R 蛋白Fig 2.1 Detection of IGF-1R and p-IGF-1R protein by Western blot.外源性 IGF-1：250 ng/mL。OSI-906：1 μM。GSK1904529A：1 μM。IGF-1R：細(xì)胞經(jīng)各種條件處理后樣本總 IGF-1R 的表達(dá)水平。p-IGF-1R: 磷酸化的 IGF-1R 表達(dá)水平。2.2 IGFR 下游通路的磷酸化我們進(jìn)一步觀察自分泌 IGF-1 引起 IGF-1R 磷酸化后對(duì)受體后信號(hào)通路活性的影響。在上述同樣的處理?xiàng)l件下，利用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)，進(jìn)行AKT、ERK1/2、p38 及 JNK 總蛋白及磷酸化蛋白的檢測(cè)。結(jié)果顯示上述四種蛋白均存在基礎(chǔ)狀態(tài)磷酸化， SNK-1、SNK-6 細(xì)胞株中 ERK1/2 和 AKT（473 位點(diǎn)）經(jīng)外源性 IGF-1刺激后可出現(xiàn)明顯活化，且 IGF-1R 抑制劑 OSI-906（1μ M）和 GSK1904529A(1

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]自分泌VEGF/VEGFR環(huán)路在NK/TCL中的表達(dá)及其對(duì)腫瘤遷移和侵襲的調(diào)控[J]. 董一文,金震,丁浩,常君,張文皓,李清,曹祥山,王立峰,陶榮.  臨床血液學(xué)雜志. 2014(03)



本文編號(hào)：3303769