發(fā)布時間：2021-07-26 14:49

　　目的:檢測IGF-1/IGF-1R自分泌環(huán)路在NK/T細胞淋巴瘤（NK/TCL）細胞株中的表達,探討IGF-1/IGF-1R信號通路對NK/TCL細胞遷移和侵襲的影響及機制。方法:利用RT-PCR及免疫熒光技術檢測IGF-1/IGF-1R的表達,蛋白印跡技術檢測IGF-1R及其下游通路激酶ERK1/2、AKT、JNK、p38的磷酸化水平,transwell技術觀察IGF-1/IGF-1R自分泌環(huán)路及下游信號通路對細胞遷移和侵襲能力的影響。ELISA法檢測IGF-1/IGF-1R自分泌環(huán)對細胞MMP-2、MMP-9、TIMP1分泌水平的影響。結果:本實驗所用三株NK/TCL細胞株SNK-1、SNK-6和SNT-8中,前兩者共表達IGF-1/IGF-1R,其共表達特征具有腫瘤特異性,而SNT-8缺乏IGF-1R表達無法形成自分泌環(huán)路。自分泌的IGF-1可引起其受體相關的酪氨酸激酶活化進而激活其下游AKT及ERK1/2信號傳導,AKT通路的活化可顯著影響細胞遷移及侵襲能力,同時IGF-1R可通過調(diào)控MMP-2、MMP-9的分泌增強腫瘤細胞基質(zhì)降解能力,促進侵襲。小分子IGF-1R抑制劑可通過... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

RT-PCR檢測IGF-1及IGF-1R基因在NK/TCL中的表達Fig1.1ExpressionofIGF-1andIGF-1RmRNAsinNK/TCLcellsbyRT-PCRassay

圖 1.2 IGF-1/IGF-1R 在 NK/TCL 細胞株中的表達Fig 1.2 Detection of IGF-1 and IGF-1R protein in NK/TCL cell lines.2．IGF-1/IGF-1R 自分泌環(huán)路具有信號轉(zhuǎn)導活性2.1 自分泌性 IGF-1 可誘導 IGF-1R 磷酸化為明確 NK/TCL 細胞中自分泌性 IGF-1 能否誘導 IGF-1R 磷酸化，我們利用蛋白質(zhì)免疫印跡檢測 IGF-1R 磷酸化水平。在未予任何外源性藥物的情況下，表達 IGF-1R 的細胞株 SNK-1、SNK-6 均存在受體基礎水平磷酸化。暴露于外源性IGF-1（250ng/mL）后 15 分鐘，磷酸化的 IGF-1R 較基礎狀態(tài)顯著升高。而分別給予 IGF-1R 選擇性抑制劑 OSI-906（1μ M）和 GSK1904529A(1μ M)后，基礎狀態(tài)及再加入外源 IGF-1 刺激后的 IGF-1R 磷酸化水平均受顯著抑制。蛋白印跡試

圖 2.1 蛋白免疫印跡技術檢測 IGF-1R 及 p-IGF-1R 蛋白Fig 2.1 Detection of IGF-1R and p-IGF-1R protein by Western blot.外源性 IGF-1：250 ng/mL。OSI-906：1 μM。GSK1904529A：1 μM。IGF-1R：細胞經(jīng)各種條件處理后樣本總 IGF-1R 的表達水平。p-IGF-1R: 磷酸化的 IGF-1R 表達水平。2.2 IGFR 下游通路的磷酸化我們進一步觀察自分泌 IGF-1 引起 IGF-1R 磷酸化后對受體后信號通路活性的影響。在上述同樣的處理條件下，利用蛋白質(zhì)免疫印跡技術，進行AKT、ERK1/2、p38 及 JNK 總蛋白及磷酸化蛋白的檢測。結果顯示上述四種蛋白均存在基礎狀態(tài)磷酸化， SNK-1、SNK-6 細胞株中 ERK1/2 和 AKT（473 位點）經(jīng)外源性 IGF-1刺激后可出現(xiàn)明顯活化，且 IGF-1R 抑制劑 OSI-906（1μ M）和 GSK1904529A(1

【參考文獻】：
期刊論文
[1]自分泌VEGF/VEGFR環(huán)路在NK/TCL中的表達及其對腫瘤遷移和侵襲的調(diào)控[J]. 董一文,金震,丁浩,常君,張文皓,李清,曹祥山,王立峰,陶榮.  臨床血液學雜志. 2014(03)



本文編號：3303769