[研究目的]：應(yīng)用納米技術(shù),構(gòu)建抗CD20納米抗體梳,研究其對非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞的體內(nèi)外抗腫瘤作用及相關(guān)作用機(jī)制,為臨床上提高非霍奇金淋巴瘤靶向治療效果和解決利妥昔單抗的耐藥問題提供新的思路和方法。[研究方法]：應(yīng)用納米技術(shù),用分子量為70kDa聚乙烯亞胺（PEI）載體將兩種不同類型的CD20抗體（Ⅰ型抗體利妥昔單抗,Ⅱ型抗體托西莫單抗）進(jìn)行交聯(lián),構(gòu)建梳狀的CD20抗體納米團(tuán)簇,我們將其命名為抗CD20納米抗體梳,標(biāo)記為PPRT （PEI-Polymer-Rituximab-Tositumomab）。隨后用動態(tài)光散射儀（DLS）比較PPRT納米抗體梳和游離單克隆抗體的粒徑大小,原子力顯微鏡（AFM）觀察PPRT納米抗體梳的顯微形態(tài),SDS-PAGE驗證抗體與PEI載體的成功連接。體外實驗中,分離新鮮人血清和人外周血淋巴瘤細(xì)胞（PBMC）作為補體和效應(yīng)細(xì)胞的來源,分別與淋巴瘤細(xì)胞及抗體孵育后,比較游離CD20抗體和PPRT納米抗體梳體外誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞的補體依賴的細(xì)胞毒作用（Complement Dependent Cytotoxicity, CDC）、抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（An... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－３：?ＰＰＲＴ納米抗體梳與ＣＤ２０抗原的結(jié)合和解離能力（Ａ）?ＲＴＸ－４８８，?Ｔｏｓ－６４７和??ＰＰＲＴ－４８８／６４７與Ｒａｊｉ細(xì)胞解育后，激光共聚焦顯微鏡觀察到的細(xì)胞表面的巧光分布情況（Ｂ－Ｃ）??

??內(nèi)化－２巧光強度分布的變異系數(shù)（ｃｏｅ巧ｄｅｎｔ?ｏｆ?ｖａｒｉａｔｉｏｎ，?ＣＶ）。如圖３－１Ｂ所示，經(jīng)過化Ｓ??和ＰＰＲＴ處理后，民ａｊｉ細(xì)胞內(nèi)ＦＬ２的變異系數(shù)產(chǎn)生了顯著的變化（ＣＶｎｔ：?２８．１±２．５?ＶＳ??ＣＶｔｏｓ：?７５．４±２．７７，?ＣＶｐｐｒｔ?７２．６±３．０４）〇??ＢａｃｋｇｆｕｎｄｊＩ?品?ｉ?Ａ?品！：?Ｉ?Ｉ??，Ｊ?兮＇＂，？，?＂１?ｉＪ?＞?Ｉ?＂?ｊ’—ｒ?今??Ｃ?ＮＴ?民?ＴＸ?Ｔｏｓ?ＰＰＢ?ＰＰ?民Ｔ??ａＨＢＢＩＢ??圖３－１：?ＰＰＲＴ納米抗體梳誘導(dǎo)１？３＂細(xì)胞溶酶體改變（Ａ－Ｂ）流式細(xì)胞術(shù)檢測ＰＰＲＴ處理后Ｒａｊｉ細(xì)胞??溶酶體探針染色巧光分布情況；（Ｃ）激光共聚焦顯微鏡觀察ＰＰＲＴ處理后民卻細(xì)胞溶酶體變化??Ｆ＾ｉｇｕｒｅ?３－１；?Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ?ｏｆ?ｌｙｓｏｓｏｍｅｓ?ｉｎ?ＰＰＲＴ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ．?（Ａ）?Ａｆｔｅｒ?也ｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｆ??ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ?ａｂｔｉｂｏｄｉｅｓ

ＰＰＲＴ納米抗體梳處理后，腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)Ｃａ也ｅｐｓｉｎ?Ｂ蛋白含量的變化進(jìn)行了定性檢??現(xiàn)�。�。Ｃａ出巧ｓｉｎ?Ｂ是一種蛋白質(zhì)，在正常情況下存在于細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，細(xì)胞漿中含量??極少［１，２’１２］。如圖３－２所示，ＲＴＸ和ＰＰＢ處理后，Ｒａｊ細(xì)胞胞漿內(nèi)幾乎觀察不到明顯的??綠色巧光（Ｃａ化ｅｐｓｉｎ?Ｂ）。而經(jīng)過Ｔｏ沸ＰＰＲＴ處理后，胞漿內(nèi)出現(xiàn)明顯的彌散分布與整??個胞漿的綠色巧光，這表明，Ｔｏｓ和ＰＰＲＴ可ｙＵ秀導(dǎo)祀細(xì)胞溶酶體內(nèi)容物的釋放，這與??上述溶酶體探針染色后所觀察到的結(jié)果相一致。??Ｔｂｓ?ＰＰＢ?ＰＰＲＴ??圖３－２：激光共聚焦顯微鏡觀察抗ＣＤ２０抗體和ＰＰＲＴ納米抗體梳處理后細(xì)胞內(nèi)Ｃａ化ｅｐｓ化Ｂ變化??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２：?Ｃｏｎｆｏｃａｌ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ?Ｂ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（ｇｒｅｅｎ）?ｉｎ?Ｒａｊｉ?ｃｅｌｌｓ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ??ＰＰＲＴ?ａｎｄ?ｆｒｅｅ?ｍＡｂｓ．?ＤＮＡ?ｗａｓ?ｃｏｕｎｔｅｒｓｔａｉｎｅｄ?ｗ祉ＩＤＡＰＩ?（ｂ山ｅ）．?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒ：?２５?ｆｘｍ．??（二）ＰＰＲＴ納米抗體梳可通過＂細(xì)胞內(nèi)交聯(lián)＂成功激活幫細(xì)胞內(nèi)??的Ｃａｓｐａｓｅ調(diào)亡通路??Ｃａ巧ａｓｅ?（Ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ?ａｓｐａｒｔａｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｐｒｏ化ａｓｅ）家族是一組結(jié)構(gòu)上相關(guān)的半脫氨酸??蛋白酶家族，其在細(xì)胞調(diào)亡的調(diào)節(jié)和執(zhí)行過程中具有重要的地位ｆＷ。Ｃａｓｐａｓｅ可通過??Ｗ下兩條途徑激活：（１）外源性激活途徑：Ｆａｓ與其配體結(jié)合后

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]凋亡小體與炎癥小體:Caspase蛋白酶的激活平臺[J]. 柴繼杰,施一公.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2014(10)
[2]非霍奇金淋巴瘤的臨床研究進(jìn)展[J]. 周立強.  癌癥進(jìn)展. 2003(Z1)

碩士論文
[1]Rituximab單點突變體H102YK抗腫瘤作用及機(jī)制研究[D]. 李華飛.第二軍醫(yī)大學(xué) 2012



本文編號：3299904