[研究目的]：應用納米技術,構建抗CD20納米抗體梳,研究其對非霍奇金淋巴瘤細胞的體內外抗腫瘤作用及相關作用機制,為臨床上提高非霍奇金淋巴瘤靶向治療效果和解決利妥昔單抗的耐藥問題提供新的思路和方法。[研究方法]：應用納米技術,用分子量為70kDa聚乙烯亞胺（PEI）載體將兩種不同類型的CD20抗體（Ⅰ型抗體利妥昔單抗,Ⅱ型抗體托西莫單抗）進行交聯,構建梳狀的CD20抗體納米團簇,我們將其命名為抗CD20納米抗體梳,標記為PPRT （PEI-Polymer-Rituximab-Tositumomab）。隨后用動態(tài)光散射儀（DLS）比較PPRT納米抗體梳和游離單克隆抗體的粒徑大小,原子力顯微鏡（AFM）觀察PPRT納米抗體梳的顯微形態(tài),SDS-PAGE驗證抗體與PEI載體的成功連接。體外實驗中,分離新鮮人血清和人外周血淋巴瘤細胞（PBMC）作為補體和效應細胞的來源,分別與淋巴瘤細胞及抗體孵育后,比較游離CD20抗體和PPRT納米抗體梳體外誘導淋巴瘤細胞的補體依賴的細胞毒作用（Complement Dependent Cytotoxicity, CDC）、抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用（An... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數】：100 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－３：?ＰＰＲＴ納米抗體梳與ＣＤ２０抗原的結合和解離能力（Ａ）?ＲＴＸ－４８８，?Ｔｏｓ－６４７和??ＰＰＲＴ－４８８／６４７與Ｒａｊｉ細胞解育后，激光共聚焦顯微鏡觀察到的細胞表面的巧光分布情況（Ｂ－Ｃ）??

??內化－２巧光強度分布的變異系數（ｃｏｅ巧ｄｅｎｔ?ｏｆ?ｖａｒｉａｔｉｏｎ，?ＣＶ）。如圖３－１Ｂ所示，經過化Ｓ??和ＰＰＲＴ處理后，民ａｊｉ細胞內ＦＬ２的變異系數產生了顯著的變化（ＣＶｎｔ：?２８．１±２．５?ＶＳ??ＣＶｔｏｓ：?７５．４±２．７７，?ＣＶｐｐｒｔ?７２．６±３．０４）〇??ＢａｃｋｇｆｕｎｄｊＩ?品?ｉ?Ａ?品�。�?Ｉ?Ｉ??，Ｊ?兮＇＂，？，?＂１?ｉＪ?＞?Ｉ?＂?ｊ’—ｒ?今??Ｃ?ＮＴ?民?ＴＸ?Ｔｏｓ?ＰＰＢ?ＰＰ?民Ｔ??ａＨＢＢＩＢ??圖３－１：?ＰＰＲＴ納米抗體梳誘導１？３＂細胞溶酶體改變（Ａ－Ｂ）流式細胞術檢測ＰＰＲＴ處理后Ｒａｊｉ細胞??溶酶體探針染色巧光分布情況；（Ｃ）激光共聚焦顯微鏡觀察ＰＰＲＴ處理后民卻細胞溶酶體變化??Ｆ＾ｉｇｕｒｅ?３－１；?Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ?ｏｆ?ｌｙｓｏｓｏｍｅｓ?ｉｎ?ＰＰＲＴ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ．?（Ａ）?Ａｆｔｅｒ?也ｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｆ??ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ?ａｂｔｉｂｏｄｉｅｓ

ＰＰＲＴ納米抗體梳處理后，腫瘤細胞胞漿內Ｃａ也ｅｐｓｉｎ?Ｂ蛋白含量的變化進行了定性檢??現�。�。Ｃａ出巧ｓｉｎ?Ｂ是一種蛋白質，在正常情況下存在于細胞的溶酶體內，細胞漿中含量??極少［１，２’１２］。如圖３－２所示，ＲＴＸ和ＰＰＢ處理后，Ｒａｊ細胞胞漿內幾乎觀察不到明顯的??綠色巧光（Ｃａ化ｅｐｓｉｎ?Ｂ）。而經過Ｔｏ沸ＰＰＲＴ處理后，胞漿內出現明顯的彌散分布與整??個胞漿的綠色巧光，這表明，Ｔｏｓ和ＰＰＲＴ可ｙＵ秀導祀細胞溶酶體內容物的釋放，這與??上述溶酶體探針染色后所觀察到的結果相一致。??Ｔｂｓ?ＰＰＢ?ＰＰＲＴ??圖３－２：激光共聚焦顯微鏡觀察抗ＣＤ２０抗體和ＰＰＲＴ納米抗體梳處理后細胞內Ｃａ化ｅｐｓ化Ｂ變化??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２：?Ｃｏｎｆｏｃａｌ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ?Ｂ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（ｇｒｅｅｎ）?ｉｎ?Ｒａｊｉ?ｃｅｌｌｓ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ??ＰＰＲＴ?ａｎｄ?ｆｒｅｅ?ｍＡｂｓ．?ＤＮＡ?ｗａｓ?ｃｏｕｎｔｅｒｓｔａｉｎｅｄ?ｗ祉ＩＤＡＰＩ?（ｂ山ｅ）．?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒ：?２５?ｆｘｍ．??（二）ＰＰＲＴ納米抗體梳可通過＂細胞內交聯＂成功激活幫細胞內??的Ｃａｓｐａｓｅ調亡通路??Ｃａ巧ａｓｅ?（Ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ?ａｓｐａｒｔａｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｐｒｏ化ａｓｅ）家族是一組結構上相關的半脫氨酸??蛋白酶家族，其在細胞調亡的調節(jié)和執(zhí)行過程中具有重要的地位ｆＷ。Ｃａｓｐａｓｅ可通過??Ｗ下兩條途徑激活：（１）外源性激活途徑：Ｆａｓ與其配體結合后

【參考文獻】：
期刊論文
[1]凋亡小體與炎癥小體:Caspase蛋白酶的激活平臺[J]. 柴繼杰,施一公.  生物化學與生物物理進展. 2014(10)
[2]非霍奇金淋巴瘤的臨床研究進展[J]. 周立強.  癌癥進展. 2003(Z1)

碩士論文
[1]Rituximab單點突變體H102YK抗腫瘤作用及機制研究[D]. 李華飛.第二軍醫(yī)大學 2012



本文編號：3299904