背景與目的:由于發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快,肺癌成為對(duì)人群身體健康威脅最大的惡性腫瘤之一。而且因?yàn)樵缙谠\斷技術(shù)和后期的有效治療的缺乏,約占肺癌85%的非小細(xì)胞肺癌有著高達(dá)86%的死亡率,因此,探索和研究清楚非小細(xì)胞肺癌的致病機(jī)理則顯得尤為重要。DNA的甲基化作為表觀遺傳學(xué)研究的重要內(nèi)容之一,被認(rèn)為是最典型導(dǎo)致基因表達(dá)或者沉默的機(jī)制,大量的研究也表明它與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。TGF-β信號(hào)通路的異常與多種腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移有著緊密的聯(lián)系。RNF111基因編碼的蛋白Arkadia可以通過(guò)泛素化途徑促進(jìn)TGF-β信號(hào)通路中的負(fù)調(diào)控因子Smad7,SnoN和Ski的降解來(lái)增強(qiáng)TGF-β信號(hào)通路。本研究主要通過(guò)檢測(cè)RNF111基因在兩株非小細(xì)胞肺癌95C（低轉(zhuǎn)移）和95D（高轉(zhuǎn)移）中mRNA表達(dá)水平,來(lái)探索兩株細(xì)胞株中RNF111的mRNA表達(dá)水平的差異與基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化引起的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控改變之間潛在的機(jī)制。方法:Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)95C、95D和A549細(xì)胞的遷移和侵襲能力;運(yùn)用Real-Time PCR和western blot檢測(cè)2株細(xì)胞株（95C和95D）中RNF111基因的表達(dá),... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
    一、非小細(xì)胞肺癌
    二、TGF-Β信號(hào)通路與腫瘤
    三、表觀遺傳學(xué)
    四、DNA甲基化研究與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系
    參考文獻(xiàn)
一、前言
二、材料和方法
    （一）材料
        1、常用試劑見(jiàn)表 1：
        2、常用試劑的配制：
        3、Amp儲(chǔ)液的配制
        4、常用儀器見(jiàn)表 2：
    （二）研究方法與步驟
        1、細(xì)胞培養(yǎng)
        2、5-Aza去甲基化藥物的溶解
        3、5-Aza去甲基化藥物處理細(xì)胞
        4、組織/細(xì)胞DNA的提取
        5、組織/細(xì)胞RNA的提取
        6、DNA的亞硫酸氫鹽修飾
        7、Transwell細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲檢測(cè)
        8、功能性CpG的位點(diǎn)的篩選
        9、重亞硫酸鹽測(cè)序PCR（Bisulfite Sequencing PCR, BSP）檢測(cè)-459CpG位點(diǎn)甲基化頻率
        10、PCR產(chǎn)物的T載體克隆
        11、甲基化和非甲基化重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        12、菌液質(zhì)粒DNA的抽提
        13、Western Blot
        14、電泳遷移率EMSA
        15、染色質(zhì)免疫共沉淀ChIP
        16、siRNA瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞
三、結(jié)果
    （一） DNA甲基化影響RNF111的表達(dá)
    （二） RNF111基因近端啟動(dòng)子區(qū)的-459CPG位點(diǎn)是一個(gè)功能性位點(diǎn)
    （三） SP1能夠靶向作用于RNF111基因啟動(dòng)子包含-459CPG位點(diǎn)的區(qū)域，并且增加RNF111的表達(dá)
    （四） RNF111基因-459CPG位點(diǎn)的高甲基化能夠降低轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合能力
    （五）DNA低甲基化導(dǎo)致的RNF111上調(diào)對(duì)TGF-Β/SMAD信號(hào)通路的影響·46
    （六） RNF111增強(qiáng)了TGF-Β/SMAD信號(hào)通路的活性和非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株的轉(zhuǎn)移和侵襲能力
四、討論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3298529