SIRT1對食管癌耐藥細胞自噬及EMT的調(diào)控作用及機制研究
發(fā)布時間:2021-07-21 20:13
目的1.考察食管癌細胞耐藥之后自噬水平的變化,以及自噬與細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial Mesenchymal Transformation,EMT)之間的關(guān)系,探究食管癌耐藥以及其誘發(fā)轉(zhuǎn)移的新機制。2.探究SIRT1對食管癌耐藥細胞自噬和EMT的調(diào)控。3.考察SIRT1抑制劑對體內(nèi)腫瘤生長的影響,確證體內(nèi)相關(guān)機制。方法1.采用MTT法檢測食管癌耐藥細胞TE-1/PTX、EC109/PTX的耐藥指數(shù);通過形態(tài)學(xué)觀察的方法比較食管癌親本細胞與耐藥細胞的形態(tài)學(xué)差異。2.利用透射電子顯微鏡觀察食管癌細胞耐藥后自噬小體及自噬溶酶體數(shù)量的變化;采用Western Blotting和免疫熒光實驗考察食管癌細胞耐藥后自噬相關(guān)蛋白表達的變化。探究食管癌細胞耐藥后自噬水平的變化。3.通過劃痕、Transwell實驗檢測細胞耐藥后遷移能力的變化;采用劃痕、Transwell、Western Blotting、免疫熒光實驗考察自噬抑制劑對食管癌耐藥細胞遷移能力以及EMT相關(guān)蛋白的影響。探究食管癌細胞耐藥后自噬和EMT的關(guān)系。4.通過SIRT1抑制劑和SIRT1 siRNA干預(yù)兩種方式干擾SIRT1表...
【文章來源】:鄭州大學(xué)河南省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:101 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
圖1.1自嗤通路不意圖??近年來,研究表明自噬在不同的癌癥、不同的發(fā)生時期發(fā)揮的作用也??
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【參考文獻】:
期刊論文
[1]晚期食管癌免疫治療藥物及臨床試驗進展[J]. 冷雪峰,羅啟余,韓泳濤. 中國胸心血管外科臨床雜志. 2020(07)
[2]胰腺癌細胞吉西他濱耐藥機制研究進展[J]. 劉成裕,劉廣宣. 人民軍醫(yī). 2019(12)
[3]食管癌病理特點及治療預(yù)后的影響因素[J]. 田慧玲,田紅艷. 全科口腔醫(yī)學(xué)電子雜志. 2019(32)
[4]上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與卵巢癌細胞順鉑耐藥的相關(guān)研究[J]. 張為家,蘇小巖,李爽,曾海. 重慶醫(yī)學(xué). 2019(13)
[5]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen. Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[6]食管癌的化療新進展[J]. 吳成利,秦叔逵. 醫(yī)師進修雜志. 2005(08)
碩士論文
[1]SIRT1的抑制劑EX527對耐藥細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及機制研究[D]. 石曉麗.鄭州大學(xué) 2018
[2]人食管鱗癌耐藥模型的建立和JP抗耐藥腫瘤作用研究[D]. 郭劉斌.鄭州大學(xué) 2014
本文編號:3295697
【文章來源】:鄭州大學(xué)河南省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:101 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
圖1.1自嗤通路不意圖??近年來,研究表明自噬在不同的癌癥、不同的發(fā)生時期發(fā)揮的作用也??
22X?-?3.1807??R21=?0.9971參???<??15:.??i?,?■??^?I?I?S?I?^?:?,1**????|1〇;——?I?J??擇5?十^__-??ffi?'?.,?????:丨?;?,i??m??〇?丨?-?J——_.....――一—.—??,.....?;??—....:?|??k?Oil?0i2?0)3?d4?0:5?〇j6?0:7?0j8?0.9?;??1?j??OD值?[??圖2.1蛋白定量標準曲線??(2)提取細胞總蛋白??收集生長狀態(tài)良好的TE-1、EC109、TE-l/PTX、EC109/PTX細胞,將??細胞接種于培養(yǎng)基中,加藥組加入培養(yǎng)基稀釋的氯喹,其終濃度為20??阿ol/L。藥物作用48h后,棄去培養(yǎng)基,胰酶消化收集不同樣品組的細胞,??離心后,加入預(yù)冷的PBS,洗滌兩次,將細胞轉(zhuǎn)移至1.5?mLEP管中,根據(jù)??收集的細胞的數(shù)量,加入不同體積的蛋白裂解液,混勻后,在渦旋儀上渦??旋30?s左右,使細胞被充分裂解。裂解完成后,將EP管放置在低溫高速離??心機中離心,轉(zhuǎn)速為11000?rpm,時間是10?min,離心完成后吸取上清,并??轉(zhuǎn)移至新的EP管中,記錄所取上清體積。??(3)樣品蛋白定量??具體操作如下:根據(jù)樣品數(shù)量,按照每個樣品設(shè)置三個復(fù)孔,A液:B??液=50:?1的比例,計算并配制所需BCA工作液的體積,混勻待用。在96??孔板中分別加入19?pLPBS,1叫蛋白樣品,200?pLBCA的工作液。完成后,??將96孔板在37°C的條件下孵育20?min,取出,在特定波長562?nm
?第二章食管癌細胞耐藥后自噬與EMT的變化及作用機制研究???的細胞活力。實驗結(jié)果如圖2.1所示:在同樣的藥物濃度下,與親本細胞相??比,耐藥細胞表現(xiàn)出更高的細胞活性。分別計算親本食管癌細胞與耐藥食??管癌細胞的IC5G,實驗數(shù)據(jù)顯示TE-1的半數(shù)抑制率(IC5G)為11?nM,??TE-1/PTX的半數(shù)抑制率(IC5〇)為97nM,TE-1/PTX的半數(shù)抑制率(IC50)??是TE-1的8倍;EC109的半數(shù)抑制率(IC5〇)為6?nM,?EC109/PTX的半數(shù)??抑制率(IC5〇)為73?nM,EC109/PTX的半數(shù)抑制率(IC5G)是EC109的??12倍(表2.6)。實驗數(shù)據(jù)表明食管癌耐藥株細胞為中度耐藥,可以用于后??續(xù)實驗。??A?B??12〇-|?+?TE-1?120]?+?EC109??〇?1〇°"?+?TE-1/PTX?〇?1°°^Ssa?+?EC109/PTX??18〇-?\?S8〇'??¥?60-?\?t?6〇"?\?\??畫¥?i?I?-?V??〇?20-?'?令―-令?一#一_-節(jié)?〇?20-?一 ̄? ̄???O?O??0?2?4?8?16?32?64?128?256?512?1024?0?2?4?8?16?32?64?128?256?512?1024??PTX?Concentration?(nmol/L)?PTX?Concentration?(nmol/L)??圖2.1?MTT實驗檢測不同濃度PTX對食管癌親本和耐藥細胞的活力影響??表2.6食管癌細胞IC5G及耐藥指數(shù)??Cell?Lines?IC50?(Mean?士?SD)?(nM)?Res
【參考文獻】:
期刊論文
[1]晚期食管癌免疫治療藥物及臨床試驗進展[J]. 冷雪峰,羅啟余,韓泳濤. 中國胸心血管外科臨床雜志. 2020(07)
[2]胰腺癌細胞吉西他濱耐藥機制研究進展[J]. 劉成裕,劉廣宣. 人民軍醫(yī). 2019(12)
[3]食管癌病理特點及治療預(yù)后的影響因素[J]. 田慧玲,田紅艷. 全科口腔醫(yī)學(xué)電子雜志. 2019(32)
[4]上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與卵巢癌細胞順鉑耐藥的相關(guān)研究[J]. 張為家,蘇小巖,李爽,曾海. 重慶醫(yī)學(xué). 2019(13)
[5]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen. Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[6]食管癌的化療新進展[J]. 吳成利,秦叔逵. 醫(yī)師進修雜志. 2005(08)
碩士論文
[1]SIRT1的抑制劑EX527對耐藥細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及機制研究[D]. 石曉麗.鄭州大學(xué) 2018
[2]人食管鱗癌耐藥模型的建立和JP抗耐藥腫瘤作用研究[D]. 郭劉斌.鄭州大學(xué) 2014
本文編號:3295697
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