目的1.考察食管癌細胞耐藥之后自噬水平的變化,以及自噬與細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial Mesenchymal Transformation,EMT）之間的關(guān)系,探究食管癌耐藥以及其誘發(fā)轉(zhuǎn)移的新機制。2.探究SIRT1對食管癌耐藥細胞自噬和EMT的調(diào)控。3.考察SIRT1抑制劑對體內(nèi)腫瘤生長的影響,確證體內(nèi)相關(guān)機制。方法1.采用MTT法檢測食管癌耐藥細胞TE-1/PTX、EC109/PTX的耐藥指數(shù);通過形態(tài)學(xué)觀察的方法比較食管癌親本細胞與耐藥細胞的形態(tài)學(xué)差異。2.利用透射電子顯微鏡觀察食管癌細胞耐藥后自噬小體及自噬溶酶體數(shù)量的變化;采用Western Blotting和免疫熒光實驗考察食管癌細胞耐藥后自噬相關(guān)蛋白表達的變化。探究食管癌細胞耐藥后自噬水平的變化。3.通過劃痕、Transwell實驗檢測細胞耐藥后遷移能力的變化;采用劃痕、Transwell、Western Blotting、免疫熒光實驗考察自噬抑制劑對食管癌耐藥細胞遷移能力以及EMT相關(guān)蛋白的影響。探究食管癌細胞耐藥后自噬和EMT的關(guān)系。4.通過SIRT1抑制劑和SIRT1 siRNA干預(yù)兩種方式干擾SIRT1表... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１自嗤通路不意圖??近年來，研究表明自噬在不同的癌癥、不同的發(fā)生時期發(fā)揮的作用也??

２２Ｘ?－?３．１８０７??Ｒ２１＝?０．９９７１參？？？＜??１５：．??ｉ?，？■??＾?Ｉ?Ｉ?Ｓ?Ｉ?＾?：?，１＊＊?？??｜１〇；——?Ｉ?Ｊ??擇５?十＾＿＿－??ｆｆｉ?＇?．，？？？？？：丨?；?，ｉ??ｍ??〇?丨?－?Ｊ——＿．．．．．――一—．—??，．．．．．?；??—．．．．：?｜??ｋ?Ｏｉｌ?０ｉ２?０）３?ｄ４?０：５?〇ｊ６?０：７?０ｊ８?０．９?；??１?ｊ??ＯＤ值?［??圖２．１蛋白定量標準曲線??（２）提取細胞總蛋白??收集生長狀態(tài)良好的ＴＥ－１、ＥＣ１０９、ＴＥ－ｌ／ＰＴＸ、ＥＣ１０９／ＰＴＸ細胞，將??細胞接種于培養(yǎng)基中，加藥組加入培養(yǎng)基稀釋的氯喹，其終濃度為２０??阿ｏｌ／Ｌ。藥物作用４８ｈ后，棄去培養(yǎng)基，胰酶消化收集不同樣品組的細胞，??離心后，加入預(yù)冷的ＰＢＳ，洗滌兩次，將細胞轉(zhuǎn)移至１．５?ｍＬＥＰ管中，根據(jù)??收集的細胞的數(shù)量，加入不同體積的蛋白裂解液，混勻后，在渦旋儀上渦??旋３０?ｓ左右，使細胞被充分裂解。裂解完成后，將ＥＰ管放置在低溫高速離??心機中離心，轉(zhuǎn)速為１１０００?ｒｐｍ，時間是１０?ｍｉｎ，離心完成后吸取上清，并??轉(zhuǎn)移至新的ＥＰ管中，記錄所取上清體積。??（３）樣品蛋白定量??具體操作如下：根據(jù)樣品數(shù)量，按照每個樣品設(shè)置三個復(fù)孔，Ａ液：Ｂ??液＝５０：?１的比例，計算并配制所需ＢＣＡ工作液的體積，混勻待用。在９６??孔板中分別加入１９?ｐＬＰＢＳ，１叫蛋白樣品，２００?ｐＬＢＣＡ的工作液。完成后，??將９６孔板在３７°Ｃ的條件下孵育２０?ｍｉｎ，取出，在特定波長５６２?ｎｍ

?第二章食管癌細胞耐藥后自噬與ＥＭＴ的變化及作用機制研究???的細胞活力。實驗結(jié)果如圖２．１所示：在同樣的藥物濃度下，與親本細胞相??比，耐藥細胞表現(xiàn)出更高的細胞活性。分別計算親本食管癌細胞與耐藥食??管癌細胞的ＩＣ５Ｇ，實驗數(shù)據(jù)顯示ＴＥ－１的半數(shù)抑制率（ＩＣ５Ｇ）為１１?ｎＭ，??ＴＥ－１／ＰＴＸ的半數(shù)抑制率（ＩＣ５〇）為９７ｎＭ，ＴＥ－１／ＰＴＸ的半數(shù)抑制率（ＩＣ５０）??是ＴＥ－１的８倍；ＥＣ１０９的半數(shù)抑制率（ＩＣ５〇）為６?ｎＭ，?ＥＣ１０９／ＰＴＸ的半數(shù)??抑制率（ＩＣ５〇）為７３?ｎＭ，ＥＣ１０９／ＰＴＸ的半數(shù)抑制率（ＩＣ５Ｇ）是ＥＣ１０９的??１２倍（表２．６）。實驗數(shù)據(jù)表明食管癌耐藥株細胞為中度耐藥，可以用于后??續(xù)實驗。??Ａ?Ｂ??１２〇－｜?＋?ＴＥ－１?１２０］?＋?ＥＣ１０９??〇?１〇°＂?＋?ＴＥ－１／ＰＴＸ?〇?１°°＾Ｓｓａ?＋?ＥＣ１０９／ＰＴＸ??１８〇－?＼?Ｓ８〇＇??￥?６０－?＼?ｔ?６〇＂?＼?＼??畫￥?ｉ?Ｉ?－?Ｖ??〇?２０－?＇?令―－令?一＃一＿－節(jié)?〇?２０－?一￣？￣？??Ｏ?Ｏ??０?２?４?８?１６?３２?６４?１２８?２５６?５１２?１０２４?０?２?４?８?１６?３２?６４?１２８?２５６?５１２?１０２４??ＰＴＸ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｎｍｏｌ／Ｌ）?ＰＴＸ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｎｍｏｌ／Ｌ）??圖２．１?ＭＴＴ實驗檢測不同濃度ＰＴＸ對食管癌親本和耐藥細胞的活力影響??表２．６食管癌細胞ＩＣ５Ｇ及耐藥指數(shù)??Ｃｅｌｌ?Ｌｉｎｅｓ?ＩＣ５０?（Ｍｅａｎ?士?ＳＤ）?（ｎＭ）?Ｒｅｓ

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]SIRT1的抑制劑EX527對耐藥細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及機制研究[D]. 石曉麗.鄭州大學(xué) 2018
[2]人食管鱗癌耐藥模型的建立和JP抗耐藥腫瘤作用研究[D]. 郭劉斌.鄭州大學(xué) 2014



本文編號：3295697