本文關(guān)鍵詞：EGFR-TKIs通過阻斷AKT下調(diào)PD-L1在EGFR突變型非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:肺癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率居首位的惡性腫瘤。對于晚期非小細(xì)胞肺癌,近年來繼傳統(tǒng)的放化療外,分子靶向治療和免疫治療成為非小細(xì)胞肺癌治療領(lǐng)域的最重要的手段之一,其個(gè)體化的精準(zhǔn)性和高效性使之成為大家研究關(guān)注的焦點(diǎn)。其中作為比例最高的驅(qū)動(dòng)基因靶點(diǎn)表皮生長因子受體(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR),和免疫治療靶點(diǎn)PD-1和PD-L1最為引人矚目。分別針對性的靶向藥物的抗腫瘤效果在體外和體內(nèi)試驗(yàn)中已得到充分的驗(yàn)證。既往部分研究發(fā)現(xiàn),EGFR信號通路與PD-1/PD-L1之間存在某種聯(lián)系,本研究旨在進(jìn)一步確定二者之間的相關(guān)性及機(jī)制,以及EGFR-TKIs是否通過阻斷EGFR通路抑制腫瘤增殖同時(shí)對PD-L1表達(dá)產(chǎn)生影響。方法:1細(xì)胞培養(yǎng)使用含有10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基常規(guī)傳代培養(yǎng)HCC827細(xì)胞,并置于含有5%C02、95%、37℃濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2 MTT法檢測一定濃度梯度厄洛替尼對人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞HCC827增殖的抑制作用,然后檢測藥物作用24h后HCC827細(xì)胞活性,并且計(jì)算藥物半數(shù)抑制濃度(IC50),繪制生長曲線圖。3應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測生長因子EGF刺激HCC827前后及厄洛替尼作用細(xì)胞后PD-L1表達(dá)的情況。4應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測生長因子EGF刺激HCC827前后和厄洛替尼作用于HCC827細(xì)胞前后,肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力的變化情況。5應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測生長因子EGF刺激HCC827細(xì)胞前后以及厄洛替尼作用于HCC827細(xì)胞后,肺癌細(xì)胞凋亡的情況。6應(yīng)用q RT-PCR技術(shù)檢測生長因子EGF刺激HCC827細(xì)胞前后及厄洛替尼作用于HCC827細(xì)胞后,EGFR、PD-L1基因的m RNA表達(dá)的情況。7應(yīng)用Western-blot的方法分別檢測厄洛替尼和AKT抑制劑作用于細(xì)胞后,其AKT、p-AKT、p-EGFR、PD-L1蛋白的表達(dá)水平8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)量資料采用x±s或M±QR表示,以單因素方差多組比較分析統(tǒng)計(jì)分析,LSD法用于進(jìn)行各組之間兩兩比較,并且以P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 MTT法檢測厄洛替尼對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用HCC827細(xì)胞HCC827細(xì)胞培養(yǎng)到對數(shù)期后,給予厄洛替尼處理,設(shè)置厄洛替尼0.001u M組、0.01u M組、0.1u M組、1u M組、10u M組,分別藥物作用于細(xì)胞24h后細(xì)胞的活性為:82.83±2.58%、71.44±2.10%、45.54±1.04%、35.02±2.47%、29.14±1.35%,IC50為0.136u M,并且隨著藥物濃度增加,細(xì)胞活性呈逐漸降低狀態(tài),具有劑量依賴性(P0.05)。2應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞膜表面分子PD-L1表達(dá)A組(空白對照)、B組(EGF刺激組)、C組(TKI組)其PD-L1的表達(dá)量分別為57.62±0.67%、74.74±1.69%、35.53±0.90%;A組、C組與B組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3應(yīng)用q RT-PCR法檢測厄洛替尼和EGF對腫瘤細(xì)胞的EGFR、PD-L1基因表達(dá)情況的影響。A組(空白對照)、B組(EGF刺激組)、C組(TKI組)其EGFR的表達(dá)量分別為:1.05±0.26、1.70±0.14、0.44±0.07;其PD-L1的表達(dá)量分別為:1.05±0.13、1.79±0.12、0.64±0.08;B組與A組、C組與B組比較均有顯著性差異(P0.05)。4 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測厄洛替尼和EGF對腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響A組(空白對照)、B組(EGF刺激)、C組(TKI組)其轉(zhuǎn)移的細(xì)胞數(shù)為123±9.89、248.33±16.21、46.33±8.50,B組與A組、C組與B、B組與A組比較均有顯著性差異(P0.05)。5流式細(xì)胞術(shù)檢測厄洛替尼和EGF對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響A組(空白對照組)、B組(EGF刺激組)、C組(TKI組)其細(xì)胞凋亡率分別為3.10±0.66%、2.20±1.09%、18.78±1.42%,C組與A組、B組有顯著差異(P0.05)A組與B組無顯著性差異(P0.05)。p EGFR、PD-L1蛋白表達(dá)的影響第一部分A組(空白對照)、B組(1.0u M/AKT阻斷劑)、C組(2.0u M/AKT阻斷劑)其p AKT的表達(dá)量分別為:0.87±0.08、0.74±0.04、0.51±0.04;B組與A組、C組與B組比較均有顯著性差異(P0.05)。其PD-L1的表達(dá)量分別為:1.40±0.07、0.97±0.07、0.62±0.15;B組與A組、C組與B組均有顯著性差異(P0.05)。第二部分A組(空白對照組)、B組(0.1u M/Erlotinib)、C組(0.2u M/Erlotinib)其p EGFR的表達(dá)量為:0.87±0.08、0.47±0.07、0.19±0.04;B組與A組、C組與B組比較均有顯著性差異(P0.05)。其PD-L1的表達(dá)量分別為:1.17±0.11、0.50±0.03、0.12±0.03;B組與A組、C組與B組均有顯著性差異(P0.05)。6應(yīng)用Western-blot的方法檢測厄洛替尼和AKT阻斷劑對p AKT、結(jié)論:1厄洛替尼可抑制HCC827細(xì)胞的活性和增殖能力,且有濃度依賴性。2 EGFR通路介導(dǎo)調(diào)控PD-L1的表達(dá)。3厄洛替尼抑制HCC827細(xì)胞的侵襲能力。4厄洛替尼提高HCC827細(xì)胞凋亡率。5 EGFR通路調(diào)控PD-L1表達(dá)至少是部分通過下游AKT信號通路。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 EGFR 厄洛替尼 EGF PD-L1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-23
• 結(jié)果23-25
• 附圖25-32
• 附表32-34
• 討論34-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 綜述 PD-1/PD-L1信號通路及其阻滯劑在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中的研究進(jìn)展38-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49
• 個(gè)人簡歷49

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1 羅俊華;李娟;;厄洛替尼治療老年晚期NSCLC的臨床觀察[J];腫瘤防治研究;2009年03期

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本文編號：329300