目的:阿霉素誘導(dǎo)建立人肝癌多藥耐藥細(xì)胞系,檢測(cè)家蠅幼蟲抗菌肽對(duì)耐藥細(xì)胞的抑制作用,探究抗菌肽對(duì)肝癌細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制。方法:1.采用阿霉素小劑量持續(xù)培養(yǎng)、濃度梯度遞增法建立人肝癌耐藥細(xì)胞系。2.培養(yǎng)細(xì)胞,繪制細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,計(jì)算細(xì)胞倍增時(shí)間。3.采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)抗菌肽和阿霉素、紫杉醇等化療藥物的敏感性。4.細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗菌肽對(duì)細(xì)胞侵襲性的影響。5.熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)阿霉素的熒光強(qiáng)度。6.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布、細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞內(nèi)阿霉素含量以及細(xì)胞表面P-gp表達(dá)情況。7.熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞多藥耐藥基因的表達(dá)情況。結(jié)果:1.建成了可以在含0.5μg/mL阿霉素的完全培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長(zhǎng)的細(xì)胞,命名為Bel-7402/ADM細(xì)胞,細(xì)胞的形態(tài)和大小與親本細(xì)胞基本相似,但是Bel-7402/ADM細(xì)胞的倍增時(shí)間較親本細(xì)胞延長(zhǎng)（P<0.05）,細(xì)胞增殖速度減慢。2.MTT檢測(cè)結(jié)果:（1）建成的Bel-7402/ADM細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥指數(shù)為10.96,且細(xì)胞對(duì)5-Fu、長(zhǎng)春新堿、紫杉醇、順鉑以及吉西他濱也不同程度耐藥,是多藥耐藥的細(xì)胞系。（2）抗菌肽對(duì)細(xì)胞的毒性作... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)（×100）

圖 1-2：光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)（×100）線和倍增時(shí)間為細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，根據(jù)回歸方程計(jì)算得兩細(xì)胞的32）h 和（35.04 ± 2.09）h，Bel-7402/ADM 細(xì)胞的倍0.05），提示細(xì)胞增殖速度減慢。

表 1-1 細(xì)胞對(duì)化療藥的敏感性檢測(cè)2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)耐藥細(xì)胞 Bel-7402/ADM 的周期變化圖1-4所示為細(xì)胞周期分布結(jié)果，Bel-7402細(xì)胞的周期分布：G0/G1期：（42.48± 2.2）%，S 期：（38.68 ± 1.97）%，G2/M 期：（18.84 ± 1.34）%；Bel-7402/ADM細(xì)胞的周期分布：G0/G1 期：（52.75 ± 3.44）%，S 期：（22.66 ± 4.5）%，G2/M期：（24.6 ± 4.5）%。Bel-7402/ADM 細(xì)胞的周期分布較親本細(xì)胞發(fā)生明顯變化：處于 G0/G1 期的細(xì)胞比例明顯升高，S 期的細(xì)胞比例下降（P＜0.05，圖 1-5）。細(xì)胞處于 G0/G1 期的 Bel-7402/ADM 細(xì)胞比例增高

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]抗菌肽Temporin-1CEa降低MCF-7/Adr細(xì)胞耐藥性的作用研究[D]. 黃靜.遼寧師范大學(xué) 2016
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[3]抗菌肽Temporin-1CEa對(duì)乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF7/ADR的作用研究[D]. 郎蕾.遼寧師范大學(xué) 2014
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本文編號(hào)：3290501