目的:阿霉素誘導(dǎo)建立人肝癌多藥耐藥細胞系,檢測家蠅幼蟲抗菌肽對耐藥細胞的抑制作用,探究抗菌肽對肝癌細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及機制。方法:1.采用阿霉素小劑量持續(xù)培養(yǎng)、濃度梯度遞增法建立人肝癌耐藥細胞系。2.培養(yǎng)細胞,繪制細胞的生長曲線,計算細胞倍增時間。3.采用MTT法檢測細胞對抗菌肽和阿霉素、紫杉醇等化療藥物的敏感性。4.細胞侵襲實驗檢測抗菌肽對細胞侵襲性的影響。5.熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)阿霉素的熒光強度。6.流式細胞儀檢測細胞周期分布、細胞凋亡率、細胞內(nèi)阿霉素含量以及細胞表面P-gp表達情況。7.熒光定量PCR法檢測細胞多藥耐藥基因的表達情況。結(jié)果:1.建成了可以在含0.5μg/mL阿霉素的完全培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長的細胞,命名為Bel-7402/ADM細胞,細胞的形態(tài)和大小與親本細胞基本相似,但是Bel-7402/ADM細胞的倍增時間較親本細胞延長（P<0.05）,細胞增殖速度減慢。2.MTT檢測結(jié)果:（1）建成的Bel-7402/ADM細胞對阿霉素的耐藥指數(shù)為10.96,且細胞對5-Fu、長春新堿、紫杉醇、順鉑以及吉西他濱也不同程度耐藥,是多藥耐藥的細胞系。（2）抗菌肽對細胞的毒性作... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

光學(xué)顯微鏡下觀察細胞形態(tài)（×100）

圖 1-2：光學(xué)顯微鏡下觀察細胞形態(tài)（×100）線和倍增時間為細胞的生長曲線，根據(jù)回歸方程計算得兩細胞的32）h 和（35.04 ± 2.09）h，Bel-7402/ADM 細胞的倍0.05），提示細胞增殖速度減慢。

表 1-1 細胞對化療藥的敏感性檢測2.4 流式細胞儀檢測耐藥細胞 Bel-7402/ADM 的周期變化圖1-4所示為細胞周期分布結(jié)果，Bel-7402細胞的周期分布：G0/G1期：（42.48± 2.2）%，S 期：（38.68 ± 1.97）%，G2/M 期：（18.84 ± 1.34）%；Bel-7402/ADM細胞的周期分布：G0/G1 期：（52.75 ± 3.44）%，S 期：（22.66 ± 4.5）%，G2/M期：（24.6 ± 4.5）%。Bel-7402/ADM 細胞的周期分布較親本細胞發(fā)生明顯變化：處于 G0/G1 期的細胞比例明顯升高，S 期的細胞比例下降（P＜0.05，圖 1-5）。細胞處于 G0/G1 期的 Bel-7402/ADM 細胞比例增高

【參考文獻】：
期刊論文
[1]抗菌肽17BIPHE2對人肺腺癌細胞A549的抑制作用[J]. 李軍,回麗媛,戰(zhàn)仕勝,王秀青.  腫瘤防治研究. 2017(10)
[2]美洲大蠊提取物逆轉(zhuǎn)BEL-7402/5-Fu多藥耐藥性的作用及機制研究[J]. 王瑤,李婷,喬婷婷,劉俊勇,沈琦,彭芳.  藥學(xué)研究. 2017(06)
[3]鋸緣青蟹Scygonadin抗菌肽的畢赤酵母表達及其產(chǎn)物抑菌活性分析[J]. 郭子好,方華,李春源,夏志生,張冬冬,馮曉青,李世超.  飼料研究. 2017(10)
[4]乳鐵蛋白抗菌肽抑制胃癌細胞增殖誘導(dǎo)其凋亡的體外研究[J]. 楊雪,石皖榮,楊偉杰,何韜,胡陽生,王珊珊,韋文美,秦宜德.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2017(06)
[5]ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體與肝癌化療耐藥相關(guān)性的研究進展[J]. 劉文斌,曹廣文.  上海預(yù)防醫(yī)學(xué). 2017(04)
[6]抗菌肽17BIPHE2對金黃色葡萄球菌生物被膜的抑制作用[J]. 回麗媛,李軍,朱明星,王秀青.  微生物學(xué)通報. 2017(04)
[7]吉西他濱誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細胞耐藥與C-IAP2表達關(guān)系的研究[J]. 張帆,黃鶴光.  中國臨床藥理學(xué)雜志. 2016(06)
[8]抗菌肽Temporin-1CEa及其改造肽抑制血管新生和黑色素瘤轉(zhuǎn)移侵襲的作用研究[J]. 任會丹,張琳,趙穎,司新紅,張亮,王澈.  中國生化藥物雜志. 2016 (02)
[9]索拉非尼誘導(dǎo)的耐藥性肝癌細胞的生物學(xué)特征分析[J]. 李明遠,徐艷敏,錢程.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2016(06)
[10]中藥對P-糖蛋白的影響及機制的研究進展[J]. 梁曉玲,馮立影,孫德春,劉高峰.  實用藥物與臨床. 2016(01)

碩士論文
[1]抗菌肽Temporin-1CEa降低MCF-7/Adr細胞耐藥性的作用研究[D]. 黃靜.遼寧師范大學(xué) 2016
[2]家蠅幼蟲抗菌肽defensin對食管癌細胞增殖、侵襲遷移的抑制作用研究[D]. 原發(fā)家.山西醫(yī)科大學(xué) 2015
[3]抗菌肽Temporin-1CEa對乳腺癌耐藥細胞MCF7/ADR的作用研究[D]. 郎蕾.遼寧師范大學(xué) 2014
[4]人乳腺癌耐藥細胞株的建立及其耐藥機制研究[D]. 李文靜.南京醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號：3290501