背景惡性腫瘤在我國居民死因中占第二位,僅次于心臟病。惡性腫瘤顯著降低病人生存期并給病人帶來巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),人們對其格外重視。對于惡性腫瘤有許多治療策略,其中疫苗治療是現(xiàn)今研究熱點(diǎn)。疫苗治療相比傳統(tǒng)治療（手術(shù)治療、放療、化療）最為重要的優(yōu)勢是其激發(fā)的免疫應(yīng)答在體內(nèi)長期發(fā)揮作用從而最大限度的避免腫瘤復(fù)發(fā)。NY-ESO-1作為眾多腫瘤疫苗靶點(diǎn)中的一位,因其在多種腫瘤組織中特異性表達(dá)、表達(dá)水平較高而成為有前景的腫瘤疫苗靶點(diǎn)。NY-ESO-1聯(lián)合各種佐劑制備腫瘤疫苗在動物實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出優(yōu)秀的抗腫瘤效果。此外,NY-ESO-1靶點(diǎn)疫苗在clinicaltrials.gov網(wǎng)站可見眾多臨床研究。已完成的有NY-ESO-1疫苗聯(lián)合伊匹單抗用于治療黑色素瘤的Ⅰ期臨床試驗(yàn),使用瑞喹莫德佐劑的NY-ESO-1疫苗用于治療腫瘤的Ⅰ期臨床試驗(yàn)。這些臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示NY-ESO-1疫苗對于腫瘤病人有一定的有效率。此外,抗腫瘤的另一策略是抑制腫瘤血管新生,這是因?yàn)槿藗冊谳^早的研究中已經(jīng)認(rèn)識到血管新生對于腫瘤的重要性。在沒有血管新生的情況下腫瘤甚至長不到直徑2mm大小。成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）作為第一個(gè)被鑒定的血管... 

【文章來源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒的PCR驗(yàn)證；1、2代表一種重組質(zhì)粒的兩個(gè)克��；堿裂解法提取質(zhì)粒后PCR

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果咪唑梯度洗脫時(shí)均未出現(xiàn)洗脫峰，只有最終 500 mM 咪唑洗脫時(shí)出現(xiàn)蛋白峰，此時(shí)收集洗脫液。過鎳柱后 SDS-PAGE 電泳上柱前原液、流穿液、500 mM 咪唑洗脫液，考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果顯示 500 mM 咪唑洗脫液有足夠純度的 pN 蛋白（圖 2-1b）。pN 蛋白經(jīng)透析和超濾后-80℃保存留待制備疫苗。

圖 2-2 pb 蛋白的純化；a：pb 蛋白在 20℃下誘導(dǎo)表達(dá)的結(jié)果，1：Marker，2：誘導(dǎo)前，3：誘導(dǎo)后總4：誘導(dǎo)后上清，5：誘導(dǎo)后沉淀；b：pb 蛋白 8 M 尿素變性，1：誘導(dǎo)前，2：誘導(dǎo)后上清，3：誘導(dǎo)后沉淀 8 M 尿素變性所得上清。2.2.3 pNb 蛋白的純化pNb 蛋白在 37℃誘導(dǎo)時(shí)主要以包涵體形式存在（圖 1-2c），降低溫度也不能改變此情況，根據(jù) 20℃誘導(dǎo)時(shí) pNb 蛋白的表達(dá)（圖 2-3a）情況認(rèn)為沒有再優(yōu)化溫度的必要。同樣地 pNb 蛋白經(jīng)超聲裂菌、3 M 尿素洗滌和 8 M 尿素變性最終得變性蛋白。將變性的pNb 蛋白上鎳柱純化，根據(jù)純化結(jié)果（2-3b）認(rèn)為須進(jìn)一步純化。挑選第 5 和第 6 管洗脫液進(jìn)行陰離子柱純化，結(jié)果顯示離子純化后 pNb 蛋白在流穿液中達(dá)到足夠的純度（2-3c）。需要說明的是陰離子柱對蛋白帶電性有嚴(yán)格的要求，透析及過陰離子柱所用各溶液 pH 均為 9.5。純化完成后把 pNb 蛋白超濾，然后-80℃保存?zhèn)溆谩?


本文編號：3287543