背景:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,乳腺癌屬于乳腺腺上皮組織的異質(zhì)性疾病,其發(fā)生與年齡、雌激素、家族史、基因易感性等因素有關。目前,研究發(fā)現(xiàn)眾多基因突變和異常表達參與乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展過程。因此,探討與乳腺癌相關的基因表達,功能及其機制研究,將會進一步揭示乳腺癌的發(fā)病機制和為防治乳腺癌發(fā)生與發(fā)展提供新的靶點。MAP2K4是絲裂原活化蛋白激酶激活劑家族的成員之一,信號級聯(lián)反應激活MAP2K4,隨后MAP2K4磷酸化而激活下游的分子JNK和P38,從而調(diào)控細胞免疫、增殖等過程,但其在乳腺癌中的作用及分子機制尚無報道。本文將著重探討MAP2K4與乳腺癌相關的基因表達,功能及其機制研究,將會進一步揭示乳腺癌的發(fā)病機制和為防治乳腺癌發(fā)生與發(fā)展提供新的靶點。研究內(nèi)容和方法1、MAP2K4在乳腺癌中的功能研究（1）使用慢病毒載體在MCF-7、A231細胞株中穩(wěn)定過表達MAP2K4,用實時熒光定量PCR檢測其過表達倍數(shù)及用Western Blot檢測其在蛋白水平表達量;（2）乳腺癌細胞穩(wěn)定過表達MAP2K4后,利用MTT實驗、流式細胞術、Edu實驗以及裸鼠原位皮下成瘤實驗檢測MCF-7和A231細... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１慢病毒感染后發(fā)綠色熒光的乳腺癌細胞株（ＬＥＶ為感染空載對照慢病毒的細胞，??

??圖１－３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ檢測－ＭＡＰ２Ｋ４的蛋白水平表達??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＭＡＰ２Ｋ４?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ??４．成功過表達ＭＡＰ２Ｋ４的乳腺癌細胞所表現(xiàn)出的體外功能變化??（１）?ＭＴＴ實驗結果??利用細胞增殖ＭＴＴ實驗檢測過表達ＭＡＰ２Ｋ４與對照組在七天內(nèi)對乳腺癌??細胞的增值情況影響。將七天檢測的所有０Ｄ值匯總后繪制出折線圖。從折線圖??中可以明顯地看出，相比于對照ＮＣ組，過表達ＭＡＰ２Ｋ４的乳腺癌細胞促進乳??腺癌細胞增殖。采用析因設計的方差分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，結果顯示，從??細胞增殖的第四天開始，０Ｄ值相比于對照組有統(tǒng)計學上的差異（Ｐ＜０．０５）。因??此，ＭＡＰ２Ｋ４在體外能夠促進乳腺癌細胞的增殖（見圖１－４）。??＋?２３１?ＮＣ??＋?ＭＣＦ－７ＭＡＰ２Ｋ４?３?＋?２３１?ＭＡＰ２Ｋ４??ｏｎ?－ｍ－?ＭＣＦ－７ＮＣ?＊??ｏ．ｏ－ｉ￣ｒ—ｉ￣ｉ￣ｉ￣ｉ￣￣ｉ￣ｉ?￣ｉ￣ｉ￣ｉ￣；￣￣Ｉ￣ｉ￣ｉ￣？??０?１?２?３?４?５?６?７?８?０１２３４５６７８??Ｄａｙｓ?Ｄａｙｓ??圖１－４?ＬＶ－ＭＡＰ２Ｋ４及對照組細胞的體外生長情況??Ｆｉｇ．?１－４?Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＶ－ＭＡＰ２Ｋ４?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｃｅｌｌ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ??（２）?Ｅｄｕ實驗結果??Ｅｄｕ實驗檢測穩(wěn)定過表達ＭＡＰ２Ｋ４后對乳腺癌細胞周期變化的影響（圖??１－５）

ＭＣＦ－７和Ａ２３１細胞遷移和侵襲的影響。與對照組相比，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ實驗結果（圖??１－７Ａ）顯示過表達ＭＡＰ２Ｋ４的實驗組穿過膜的細胞數(shù)明顯比對照組多（Ｐ＜〇．０５），??細胞運動能力增強。Ｂｏｙｄｅｎ實驗（圖１－７Ｂ）也得到類似的結果，同樣的時間點??發(fā)現(xiàn)過表達ＭＡＰ２Ｋ４對乳腺癌細胞ＭＣＦ－７和Ａ２３１細胞遷移的能力強。我們進??行３次獨立實驗和統(tǒng)計學ｔ檢驗分析差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）。因此，我??們可以得出結論：ＭＡＰ２Ｋ４能夠在體外促進乳腺癌細胞的侵襲和遷移能力。??Ａ?Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ??ＭＣＦ－７?Ａ－２３１??．＊?－?．?，＼?＇?□?ＮＣ??Ｆ?？?＊？?、?＊？?？?－?％?口?ＭＡＰ２Ｋ４??？?－?－．＇Ｖ?？、?．?？＊．??ＮＣ?．?１〇〇ｌ?ｉ??■ｆ?＂?？?．?＇ｉ?＞?＊?ｓｏ－?Ｔ??ｉｓ，－?－?－?ｓ?ｒ－Ｈ??，?．；＊：?＊?？？？？?＾?ｆ?Ｒｎ??＇?，ｉ?４〇－?ｒ＾ｉ??ＭＡＰ２Ｋ４ｔ；，?；?；；?＾?＾?＼?Ｓ?－??卜１“?二？，?Ｊ?１Ｊ￣——￣Ｕ￣Ｉ—??＿?－?＾?Ｖ－＊＊：?：｝?ＭＣＦ．７?２３１??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]細胞增殖周期的調(diào)控及其抗調(diào)控因子抗體在腫瘤病理學研究中的應用[J]. 盧德宏,董彬,徐慶中.  診斷病理學雜志. 1996(01)



本文編號：3281511