目的本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌耐藥細胞MCF-7/ADR細胞株中存在一種新的CD44變異體（CD44v16）,可以明顯增強乳腺癌的干性,并促進乳腺癌細胞對阿霉素的耐藥。本研究旨在進一步探索CD44v16對乳腺癌細胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移的影響及其機制研究,為乳腺癌的復發(fā)和轉(zhuǎn)移的診斷和治療提供理論依據(jù)。方法1.根據(jù)CD44v16的基因序列設(shè)計并合成質(zhì)粒,通過慢病毒將其轉(zhuǎn)染至乳腺癌細胞MCF-7及MDA-MB-231中以獲得穩(wěn)定過表達細胞系,細胞可分為以下幾組:CD44v16過表達組,陰性對照（NC）組及空白對照（N）組。并通過熒光定量PCR技術(shù)以進一步驗證過表達CD44v16及陰性對照組慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染成功后CD44v16的mRNA相對表達量。2.通過CCK8法及流式細胞儀技術(shù)檢測過表達CD44v16后MCF-7細胞及MDA-MB-231細胞增殖及凋亡的改變。3.通過細胞劃痕法及Transwell侵襲試驗檢測CD44v16過表達后對MCF-7細胞及MDA-MB-231細胞遷移及侵襲能力的影響并進行相關(guān)機制研究。4.利用qRT-PCR及Western blot法檢測各組細胞內(nèi)侵襲相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒轉(zhuǎn)染乳腺癌細胞后各組細胞內(nèi)綠色熒光蛋白（GFP）的表達（x100）及轉(zhuǎn)染后CD44v16的mRNA相對表達量注：A：熒光顯微鏡下觀察MCF-7細胞轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒后GFP表達；B：MCF-7細胞轉(zhuǎn)染后

CD44v16調(diào)控乳腺癌遷移及侵襲能力及機制研究18高于NC組細胞及N組細胞（P<0.01，見圖2.2B）。圖2.2CCK8法檢測轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒后細胞增殖率注：A：MCF-7細胞在病毒轉(zhuǎn)染后各時間段內(nèi)細胞增殖率；B：MDA-MB-231細胞病毒轉(zhuǎn)染后各時間段內(nèi)細胞增殖率；**P<0.01，***P<0.001；Figure2.2EffectsoflentivirusinfectiononproliferationrateofbreastcancercellbyCCK-8assayNote:A:TheproliferationrateofMCF-7infectedwithlentivirusineachperiod;B:TheproliferationrateofMDA-MB-231infectedwithlentivirusineachperiod;**P<0.01，***P<0.001;2.3.3CD44v16過表達抑制乳腺癌細胞的凋亡流式細胞儀結(jié)果表明，MCF-7/CD44v16過表達組細胞的凋亡率明顯低于NC組細胞及N組細胞（P<0.001，見圖2.3A、B）。MDA-MB-231/CD44v16過表達組的細胞凋亡能力也同樣明顯低于NC組細胞及N組細胞（P<0.001，見圖2.3C、D）。

江蘇大學碩士學位論文19圖2.3流式細胞儀檢測乳腺癌細胞轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒后細胞凋亡能力注：A，B：MCF-7細胞病毒轉(zhuǎn)染后細胞凋亡能力變化；C，D：MDA-MB-231細胞病毒轉(zhuǎn)染后細胞凋亡能力變化；Figure2.3TheapoptoticabilityofbreastcancercellinfectedwithlentivirusbyflowcytometryNote:A,B:TheapoptoticabilityofMCF-7infectedwithlentivirus;C,D:TheapoptoticabilityofMDA-MB-231infectedwithlentivirus;***P<0.001;2.3.4CD44v16過表達調(diào)控乳腺癌細胞的遷移在細胞劃痕處理后用無血清培養(yǎng)48h，結(jié)果顯示MCF-7/CD44v16過表達組細胞遷移能力明顯高于NC組細胞及N組細胞（P<0.001，見圖2.4A，B）。與此同時，在MDA-MB-231/CD44v16過表達組細胞中的遷移能力同樣明顯高于NC組細胞及N組細胞（P<0.001，見圖2.4C，D）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]CD44v16通過細胞自噬途徑增強乳腺癌MCF7細胞的化療耐藥性[J]. 錢傅燕雯,馮凡,許文林.  腫瘤. 2019(06)



本文編號：3266954