目的本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR細(xì)胞株中存在一種新的CD44變異體（CD44v16）,可以明顯增強(qiáng)乳腺癌的干性,并促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥。本研究旨在進(jìn)一步探索CD44v16對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制研究,為乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的診斷和治療提供理論依據(jù)。方法1.根據(jù)CD44v16的基因序列設(shè)計(jì)并合成質(zhì)粒,通過(guò)慢病毒將其轉(zhuǎn)染至乳腺癌細(xì)胞MCF-7及MDA-MB-231中以獲得穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞系,細(xì)胞可分為以下幾組:CD44v16過(guò)表達(dá)組,陰性對(duì)照（NC）組及空白對(duì)照（N）組。并通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)以進(jìn)一步驗(yàn)證過(guò)表達(dá)CD44v16及陰性對(duì)照組慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染成功后CD44v16的mRNA相對(duì)表達(dá)量。2.通過(guò)CCK8法及流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)過(guò)表達(dá)CD44v16后MCF-7細(xì)胞及MDA-MB-231細(xì)胞增殖及凋亡的改變。3.通過(guò)細(xì)胞劃痕法及Transwell侵襲試驗(yàn)檢測(cè)CD44v16過(guò)表達(dá)后對(duì)MCF-7細(xì)胞及MDA-MB-231細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響并進(jìn)行相關(guān)機(jī)制研究。4.利用qRT-PCR及Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)侵襲相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后各組細(xì)胞內(nèi)綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)（x100）及轉(zhuǎn)染后CD44v16的mRNA相對(duì)表達(dá)量注：A：熒光顯微鏡下觀察MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒后GFP表達(dá)；B：MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染后

CD44v16調(diào)控乳腺癌遷移及侵襲能力及機(jī)制研究18高于NC組細(xì)胞及N組細(xì)胞（P<0.01，見(jiàn)圖2.2B）。圖2.2CCK8法檢測(cè)轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒后細(xì)胞增殖率注：A：MCF-7細(xì)胞在病毒轉(zhuǎn)染后各時(shí)間段內(nèi)細(xì)胞增殖率；B：MDA-MB-231細(xì)胞病毒轉(zhuǎn)染后各時(shí)間段內(nèi)細(xì)胞增殖率；**P<0.01，***P<0.001；Figure2.2EffectsoflentivirusinfectiononproliferationrateofbreastcancercellbyCCK-8assayNote:A:TheproliferationrateofMCF-7infectedwithlentivirusineachperiod;B:TheproliferationrateofMDA-MB-231infectedwithlentivirusineachperiod;**P<0.01，***P<0.001;2.3.3CD44v16過(guò)表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞的凋亡流式細(xì)胞儀結(jié)果表明，MCF-7/CD44v16過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的凋亡率明顯低于NC組細(xì)胞及N組細(xì)胞（P<0.001，見(jiàn)圖2.3A、B）。MDA-MB-231/CD44v16過(guò)表達(dá)組的細(xì)胞凋亡能力也同樣明顯低于NC組細(xì)胞及N組細(xì)胞（P<0.001，見(jiàn)圖2.3C、D）。

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文19圖2.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒后細(xì)胞凋亡能力注：A，B：MCF-7細(xì)胞病毒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡能力變化；C，D：MDA-MB-231細(xì)胞病毒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡能力變化；Figure2.3TheapoptoticabilityofbreastcancercellinfectedwithlentivirusbyflowcytometryNote:A,B:TheapoptoticabilityofMCF-7infectedwithlentivirus;C,D:TheapoptoticabilityofMDA-MB-231infectedwithlentivirus;***P<0.001;2.3.4CD44v16過(guò)表達(dá)調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的遷移在細(xì)胞劃痕處理后用無(wú)血清培養(yǎng)48h，結(jié)果顯示MCF-7/CD44v16過(guò)表達(dá)組細(xì)胞遷移能力明顯高于NC組細(xì)胞及N組細(xì)胞（P<0.001，見(jiàn)圖2.4A，B）。與此同時(shí)，在MDA-MB-231/CD44v16過(guò)表達(dá)組細(xì)胞中的遷移能力同樣明顯高于NC組細(xì)胞及N組細(xì)胞（P<0.001，見(jiàn)圖2.4C，D）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CD44v16通過(guò)細(xì)胞自噬途徑增強(qiáng)乳腺癌MCF7細(xì)胞的化療耐藥性[J]. 錢傅燕雯,馮凡,許文林.  腫瘤. 2019(06)



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