[研究背景與目的]肺癌是世界范圍內(nèi)死亡率最高的惡性腫瘤之一。在男性惡性腫瘤發(fā)病率中肺癌排第一位,在女性中排第二位,嚴(yán)重威脅著人類健康。肺癌中最常見的類型為非小細(xì)胞肺癌,占肺癌所有種類的80%左右。非小細(xì)胞肺癌早期診斷率低、惡性程度高、對化療放療敏感性較低,即便是可以經(jīng)手術(shù)治療的早期非小細(xì)胞肺癌,經(jīng)手術(shù)治療后其五年生存率也不超過60%。造成非小細(xì)胞肺癌預(yù)后不佳的主要原因為發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移以及對化療藥物產(chǎn)生耐藥。所以,深入研究肺癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制,闡明其調(diào)控網(wǎng)絡(luò),篩選其中影響肺癌進(jìn)程的關(guān)鍵節(jié)點分子,鑒定可以用于阻斷肺癌侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥進(jìn)程的分子靶標(biāo)具有重要的臨床意義。MicroRNA （MiRNA,微小RNA）分子因其具有在時間性和空間性多調(diào)控精度的特點而越來越受到人們關(guān)注。miRNA分子幾乎參與包括肺癌在內(nèi)的所有腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程,與腫瘤起始、腫瘤生長、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、腫瘤異位定植、腫瘤新生血管形成等各個方面均有密切關(guān)系。雖然目前關(guān)于miRNA分子與肺癌的相關(guān)性已有不少的研究,但鑒于miRNA分子調(diào)控具有“一對多”的特性,在同一類型腫瘤中有許多不同的miRNA分子在發(fā)揮作用,即便是同一mi... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖３－１．ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測非小細(xì)胞肺癌及其配對癌旁正常組織中ｍｉ民－１０１的表達(dá)模式（黑色柱??形圖表示癌旁正常組織，灰魚柱形圖表示肺癌組織，呼＜化０１，＃Ｐ＜０．０５）??

的表達(dá)均顯著低于ＭＲＣ５細(xì)胞中ｍｉＲ－１０１的表達(dá)水平，兩者比較差異具有顯著??性（Ｐ?＜?０．０５），而ＲＵＮＸ１的表達(dá)則在肺癌細(xì)胞株中明顯升高，與其在ＭＲＣ５??細(xì)胞中的表達(dá)水平相比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（？＜化〇５）（圖３－４Ａ）。因??ｍｉＲＮＡ的調(diào)控作用最終是影響靴基因在蛋白質(zhì)水平的表達(dá)，而蛋白質(zhì)水平也是??一個分子執(zhí)行生物學(xué)功能的最終形式，所Ｗ我們進(jìn)一步抽提細(xì)胞的總蛋白，采??用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ的方法檢測了不同細(xì)胞株中ＲＵＮＸ１的表達(dá)。結(jié)果顯示，與??ｍＲＮＡ水平相一致，蛋白質(zhì)水平的ＲＵＮＸ１在肺癌細(xì)胞株中顯著高于ＭＲＣ５細(xì)??胞（圖３－４Ｂ）。據(jù)此我們可Ｗ看出，肺癌細(xì)胞中ｍｉＲ－１０１表達(dá)下調(diào)，這一點其??在肺癌組織中的表達(dá)模式相符合，而ＲＵＮＸ１在肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)模式也與??其在肺癌組織中的表達(dá)模式相一致。且初步可Ｗ看出，ｍｉＲ－１０１的表達(dá)與??３１??

（Ｕ２）?ｍｇ／Ｌ，?ｍｉＲ－ｌＯｌ過表達(dá)組其ＩＣ５０值降低為（１．０１?±?０．０６）?ｍｇ／Ｌ，兩者比??較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜?０．０５），提示ｍｉＲ－１０１過表達(dá)可顯著提高肺癌細(xì)??胞對化療藥物順鉆的敏感性（圖３－８，圖３－１１，表３－１）。為了證實這一結(jié)果，??我們在肺癌細(xì)胞ＷＤ中重復(fù)了這一實驗。結(jié)果與Ｈ口９９細(xì)胞相一致。在使用??ｍｉ民－１０１特異性ｍｉｍｉｃｓ導(dǎo)致細(xì)胞中ｍｉＲ－１０１表達(dá)上調(diào)后，細(xì)胞中蛋白水平??ＲＵＮＸ１表達(dá)顯著下調(diào)。同樣使用不同濃度的順鉆處理細(xì)胞后，ｍｉＲ－１０１過表達(dá)??組細(xì)胞的活性明顯降低。對順鉆的ＩＣ５０值也由對照組中的（６．４３?±?０．５１）?ｍｇ／Ｌ??下降到了（１．６７?±０．０１）?ｍｇ／Ｌ，兩者比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜?０．０５）。??Ａ。。。＂。、於物?Ｈ１２９９?Ｂ?妒。Ｗ。、知如巧?９５０??ｊＥＴ?細(xì)關(guān)?Ｘ１?ＲＵＮＸ１??ＮｉｉＭＩｐＨ?Ｍｃｔｉｎ?４Ｍ＞｜?ｐ－ａｃｔｉｎ??２．５？ｊ?ＳＣ巧ｍｂ言ｅ?ｃｏｎｔｒｏ：?時ｓｃｉ＊ａｍｂ�。�?ｃｏｎｔｒｏｌ??Ｂ?ｍ巧－１０１?ｍｉｍｉｃｓ?—?ｍ巧－１０１?ｍｉｍ比ｓ??｜２－。－??�。椋螅桑ⅲ�?＼＼??１。５－?ｆｓ．??Ｏ．Ｏ－Ｈ￣Ｉ￣Ｉ￣Ｉ＿Ｉ?ｏ．ｏｉ－，一，￣￣，誦??０?０．５?１?２?４?８?１６?３２?０?０．５?１?２?４?８?１６?３２??ｃＤＤＰ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｍｇ／Ｌ）?ｃＤＤＰ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｍｇ／Ｌ）??圖３－８．肺癌細(xì)胞系Ｈ口９９和９５Ｄ中

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Epigenetics of hepatocellular carcinoma:Role of microRNA[J]. Sharad Khare,Qiong Zhang,Jamal A Ibdah.  World Journal of Gastroenterology. 2013(33)
[2]miR-18a對A549細(xì)胞的放射增敏作用及其機制[J]. 吳磊,孫建國,徐睿,李德志,徐燕梅,馬虎,李雪濤,彭麗娜,陳正堂.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2013(09)



本文編號：3265437