目的:探索HER2陽性乳腺癌中,NRG1/HER3通路激活在曲妥珠單抗原發(fā)耐藥機制中的意義,以及NRG1依賴性HER3單克隆抗體（3D4）的抑制效果。選用BT474（曲妥珠單抗敏感）和MDA-MB-453（曲妥珠單抗原發(fā)耐藥）HER2陽性乳腺癌細(xì)胞為研究對象,利用曲妥珠單抗和/或HER3抗體阻斷HER2/HER3激活,利用siRNA沉默HER3基因,分析不同處理后下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子和細(xì)胞凋亡、活力的變化規(guī)律,闡明NRG1/HER3激活在曲妥珠單抗原發(fā)耐藥中的重要作用。方法:1.通過外源性NRG1刺激,曲妥珠單抗和/或HER3抗體處理敏感BT474細(xì)胞和耐藥MDA-MB-453細(xì)胞后,利用western blot方法檢測p-HER2、p-HER3、p-Akt、pMAPK信號通路的蛋白表達量。2.把小干擾RNA（靶向HER3基因）轉(zhuǎn)染至耐藥MDA-MB-453細(xì)胞中進行基因沉默,利用western blot方法檢測p-HER2、p-HER3、p-Akt、p-MAPK表達的變化。3.通過外源性NRG1刺激,曲妥珠單抗和/或HER3抗體處理敏感BT474細(xì)胞與耐藥MDA-MB-453細(xì)胞后,應(yīng)用... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同藥物刺激對BT474細(xì)胞p-HER2和p-HER3表達的影響

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2.2 在敏感 BT474 乳腺癌細(xì)胞中，NRG1/HER3 的激活對耐藥相關(guān)信號分子 p-Akt 和 p-MAPK 的影響外源性 NRG1 刺激曲妥珠單抗敏感 BT474 乳腺癌細(xì)胞后，磷酸化蛋（Phospho Protein Kinase B, p-Akt）的表達水平上調(diào)。在沒有 NRG1 刺激的曲妥珠單抗和 HER3 抗體均顯著下調(diào) p-Akt 的表達（P<0.01），但曲妥珠單抗抗體的抑制效果更強。而 NRG1 刺激后，曲妥珠單抗對 p-Akt 的抑制作用減抗體的抑制作用變得更加顯著（P<0.01），兩種抗體聯(lián)合應(yīng)用顯示協(xié)同效應(yīng)和 D）。在沒有 NRG1 刺激的情況下，曲妥珠單抗可抑制敏感 BT474 細(xì)胞磷原活化蛋白激酶（Phospho Mitogen-activated Protein Kinase, p-MAPK）的表制作用在 NRG1 刺激后消失，而此時 HER3 抗體顯示出顯著的下調(diào)作用（（圖 1，E）。

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文外源性 NRG1 刺激可使 p-HER3 和 HER3 的蛋白表達水平顯著升高。不NRG1 刺激，曲妥珠單抗都不能下調(diào) p-HER2 和 p-HER3 的表達。但是在 NR后，HER3 抗體可以顯著下調(diào) p-HER2 和 p-HER3 的表達（P<0.01）（圖 3，2.3 NRG1 依賴性 HER3 抗體可抑制耐藥 MDA-MB-453 乳腺癌細(xì)胞HER2、p-HER3 的表達

【參考文獻】：
期刊論文
[1]OVEREXPRESSION OF p53, EGFR,C-ERBB2 AND C-ERBB3 IN ENDOMETRIOIDCARCINOMA OF THE OVARY[J]. 冷金花,郎景和,沈鏗,郭麗娜.  Chinese Medical Sciences Journal. 1997(02)



本文編號：3259806