發(fā)布時間：2021-06-29 09:49

　　研究背景和目的細胞質(zhì)多聚腺苷酸結(jié)合蛋白3（CPEB3）靶向連接mRNAs。我們的既往研究表明CPEB3與結(jié)直腸癌（CRC）患者的預(yù)后相關(guān),但其在結(jié)直腸癌中的分子機制和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)仍不清楚。本課題擬通過檢測CPEB3、CD86和CD163在結(jié)直腸癌組織和細胞中的表達,初步分析CPEB3與腫瘤相關(guān)巨噬細胞（TAM）標志分子的相關(guān)性,并通過一系列分子生物學(xué)實驗,探究CPEB3在結(jié)直腸癌免疫微環(huán)境中的調(diào)控機制,尋找結(jié)直腸癌治療的新靶點。研究方法1.CPEB3,CD86和CD163在結(jié)直腸癌組織和細胞中的表達和相互關(guān)系（1）在結(jié)直腸癌組織中,分別通過qRT-PCR和IHC檢測CPEB3,CD86和CD163在其中的表達;（2）構(gòu)建巨噬細胞和結(jié)直腸癌細胞體外共培養(yǎng)模型,qRT-PCR和flow cytometry檢測CD86和CD163表達;Luminex assays檢測TAM上清中細胞因子的表達。2.CPEB3抑制TAM分泌IL-6促進結(jié)直腸癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的作用（1）通過Luminex assays和ELISA實驗檢測TAM上清中IL-6的分泌;通過CCK8和Transwell實驗檢... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ｑＲＴ－ＰＣＲ實驗檢測在８２對結(jié)直腸癌組織及其癌旁組織中，ＣＰＥＢ３和ＣＤ８６?ｍＲＮＡ??表達水平并分析了結(jié)直腸癌組織中ＣＰＥＢ３與ＣＤ８６、ＣＤ８６／ＣＤ１６３的相關(guān)性

第一章ＣＰＥＢ３、ＣＤ８６和ＣＤ１６３在結(jié)直腸癌組織和細胞中的表達鑒定和相互關(guān)系??／?／Ｖ?／??ＣＰＥＢ３?來，?�。�?７２ｋｄ???：?一??ＧＡＰＤＨ?ｍｍ?ｍｍｍ?ｍｍ?３６ｋｄ??圖１－３細胞系中ＣＰＥＢ３?ｐｒｏｔｅｉｎ表達水平。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ＣＰＥＢ３?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?ｉｎ?ｖａｒｉｏｕｓ?ＣＲＣ?ｌｉｎｅｓ．??根據(jù)上述結(jié)直腸癌細胞中ＣＰＥＢ３的表達情況，我們選擇ＣＰＥＢ３相對低表達??的結(jié)直腸癌細胞株ＳＷ４８０和ＨＣＴ１１６進行外源性過表達ＣＰＥＢ３，而對ＣＰＥＢ３相對??高表達的細胞株ＲＫＯ和ＬｏＶｏ進行內(nèi)源性敲低ＣＰＥＢ３。進一步我們通過慢病毒轉(zhuǎn)??染技術(shù)，構(gòu)建了?ＣＰＥＢ３過表達和空載質(zhì)粒慢病毒，分別感染ＳＷ４８０和ＨＣＴ１１６兩??株細胞，構(gòu)建了ＳＷ４８０－ｃｏｎｔｒｌ、ＳＷ４８０－ＣＰＥＢ３、ＨＣＴ１１６－ｃｏｎｔｒ＾ＢＨＣＴ１１６－ＣＰＥＢ３??細胞株。同時，我們使用ＣＰＥＢ３特異性ｓｈＲＮＡ和相應(yīng)的對照（Ｃｏｎｔｒｌ）慢病毒感??染ＲＫＯ和ＬｏＶｏ兩株細胞，構(gòu)建了ＲＫＯ－ｃｏｎｔｒｌ、ＲＫ０－ｓｈＣＰＥＢ３、ＬｏＶｏ－ｃｏｎｔｒｌ和??ＬｏＶｏ－ｓｈＣＰＥＢ３細胞株。最后，我們通過ｑＲＴ－ＰＣＲ?（圖?１－４Ａ）和ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ?（圖??１－４Ｂ）驗證ＣＰＥＢ３過表達和敲低效果。??Ａ?１２００￣｜?＊＊?ｍ｜?ｐｉ?｜?＜?１．５＊１?ｓｈＣｔｒｌ??ｉｌｌ?１?ｒ３?ＨｉｉｉＴ??Ｐ?ｌＵｔ?ｓ｜：：ｌｕｌｉ??ＳＷ４８０?ＨＣＴ１１６?ＬＯＶＯ?ＲＫＯ??Ｂ??

第一章ＣＰＥＢ３、ＣＤ８６和ＣＤ１６３在結(jié)直腸癌組織和細胞中的表達鑒定和相互關(guān)系??／?／Ｖ?／??ＣＰＥＢ３?來，?�。�?７２ｋｄ???：?一??ＧＡＰＤＨ?ｍｍ?ｍｍｍ?ｍｍ?３６ｋｄ??圖１－３細胞系中ＣＰＥＢ３?ｐｒｏｔｅｉｎ表達水平。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ＣＰＥＢ３?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?ｉｎ?ｖａｒｉｏｕｓ?ＣＲＣ?ｌｉｎｅｓ．??根據(jù)上述結(jié)直腸癌細胞中ＣＰＥＢ３的表達情況，我們選擇ＣＰＥＢ３相對低表達??的結(jié)直腸癌細胞株ＳＷ４８０和ＨＣＴ１１６進行外源性過表達ＣＰＥＢ３，而對ＣＰＥＢ３相對??高表達的細胞株ＲＫＯ和ＬｏＶｏ進行內(nèi)源性敲低ＣＰＥＢ３。進一步我們通過慢病毒轉(zhuǎn)??染技術(shù)，構(gòu)建了?ＣＰＥＢ３過表達和空載質(zhì)粒慢病毒，分別感染ＳＷ４８０和ＨＣＴ１１６兩??株細胞，構(gòu)建了ＳＷ４８０－ｃｏｎｔｒｌ、ＳＷ４８０－ＣＰＥＢ３、ＨＣＴ１１６－ｃｏｎｔｒ＾ＢＨＣＴ１１６－ＣＰＥＢ３??細胞株。同時，我們使用ＣＰＥＢ３特異性ｓｈＲＮＡ和相應(yīng)的對照（Ｃｏｎｔｒｌ）慢病毒感??染ＲＫＯ和ＬｏＶｏ兩株細胞，構(gòu)建了ＲＫＯ－ｃｏｎｔｒｌ、ＲＫ０－ｓｈＣＰＥＢ３、ＬｏＶｏ－ｃｏｎｔｒｌ和??ＬｏＶｏ－ｓｈＣＰＥＢ３細胞株。最后，我們通過ｑＲＴ－ＰＣＲ?（圖?１－４Ａ）和ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ?（圖??１－４Ｂ）驗證ＣＰＥＢ３過表達和敲低效果。??Ａ?１２００￣｜?＊＊?ｍ｜?ｐｉ?｜?＜?１．５＊１?ｓｈＣｔｒｌ??ｉｌｌ?１?ｒ３?ＨｉｉｉＴ??Ｐ?ｌＵｔ?ｓ｜：：ｌｕｌｉ??ＳＷ４８０?ＨＣＴ１１６?ＬＯＶＯ?ＲＫＯ??Ｂ??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]2015年中國惡性腫瘤流行情況分析[J]. 鄭榮壽,孫可欣,張思維,曾紅梅,鄒小農(nóng),陳茹,顧秀瑛,魏文強,赫捷.  中華腫瘤雜志. 2019 (01)
[2]大腸癌篩查共識與爭議[J]. 王振軍,付李緣.  臨床外科雜志. 2018(10)
[3]Lynch syndrome and Lynch syndrome mimics: The growing complex landscape of hereditary colon cancer[J]. John M Carethers,Elena M Stoffel.  World Journal of Gastroenterology. 2015(31)



本文編號：3256223