目的前期研究發(fā)現(xiàn)ERCC1基因可能參與順鉑繼發(fā)耐藥,文中旨在探討短發(fā)夾RNA（shRNA）靶向沉默切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因組1（ERCC1）對(duì)不同濃度順鉑處理的肺腺癌順鉑耐藥細(xì)胞株A549/DDP增殖和凋亡的影響。方法實(shí)驗(yàn)分為陰性對(duì)照組（shRNA）、空白對(duì)照組（lipofectamine 2000）、ERCC1-shRNA1組（ERCC1-shRNA1）、ERCC1-shRNA2組（ERCC1-shRNA2）。設(shè)計(jì)并合成靶向人的ERCC1基因shRNA1、shRNA2;采用脂質(zhì)體lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染入A549/DDP細(xì)胞,通過Real-time PCR和Western blot分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后ERCC1 mRNA和蛋白表達(dá);MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞增殖抑制率的變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡。結(jié)果成功構(gòu)建ERCC1-shRNA并轉(zhuǎn)入A549/DDP,ERCC1-shRNA1組、ERCC1-shRNA2組mRNA表達(dá)量[（0.20±0.04）、（0.47±0.28）]明顯低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組[（0.96±0.12）、（0.84±0.07）],差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義... 

【文章來源】：醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2017,30(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 主要材料和試劑
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 shRNA的設(shè)計(jì)與構(gòu)建
        1.2.3 質(zhì)粒抽提
        1.2.4 轉(zhuǎn)染
        1.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        1.2.6 Western blot實(shí)驗(yàn)
        1.2.7 MTT法測(cè)定順鉑對(duì)RNA干擾前后的A549/DDP細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度
        1.2.8 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期
        1.2.9 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞ERCC1的mRNA表達(dá)
    2.2 Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞ERCC1的蛋白表達(dá)
    2.3 MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后A549/DDP對(duì)順鉑半數(shù)抑制量的變化
    2.4 ERCC1-shRNA1對(duì)細(xì)胞周期的阻滯作用
    2.5 ERCC1-shRNA1對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3249715