目的:胰腺癌是世界范圍內(nèi)惡性度最高的腫瘤之一,胰腺癌患者的五年生存率小于6%,每年胰腺癌患者的死亡人數(shù)高居全球腫瘤死亡的第八位,對人類的生命和健康帶了極大的威脅。其發(fā)病率逐年增高并且呈現(xiàn)年輕化的趨勢。由于胰腺是乏血供器官,所以胰腺癌對放、化療均不敏感,手術(shù)是治療胰腺癌的最佳方式。但是由于胰腺癌發(fā)病隱匿、早期就發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移,所以大部分患者發(fā)現(xiàn)時就失去了手術(shù)機(jī)會。胰腺癌因其高度惡性,目前缺乏有效的早期診斷、預(yù)后等生物標(biāo)志物。胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多階段、多基因改變累積的長期過程。目前,其確切的發(fā)病機(jī)制仍然不清楚。隨著基因診斷技術(shù)和分子生物學(xué)的快速發(fā)展,在目前已知的和胰腺癌發(fā)生密切相關(guān)的基因以外,近年來又發(fā)現(xiàn)了一些與胰腺癌關(guān)系密切的基因,這些基因在胰腺癌中所扮演的角色越來越收到人們的重視。研究方法:1、利用生物信息學(xué)整合得到總樣本數(shù)大于120例,具有良好代表性的胰腺癌及癌旁組織測序數(shù)據(jù)。明確在胰腺癌及癌旁組織中差異表達(dá)的基因,對這些差異基因所富集的功能及通路進(jìn)行注釋,得到其相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)。確定差異基因與胰腺癌診斷及預(yù)后的相關(guān)性,結(jié)合生物信息學(xué)分析及免疫組化分析,確定出數(shù)個與胰腺癌預(yù)后高... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:鑒定COL11A1,GJB2和CTRL作為胰腺癌標(biāo)志物
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 生物信息學(xué)研究
            2.1.1 GEO數(shù)據(jù)集的篩選
            2.1.2 胰腺癌測序數(shù)據(jù)篩選及整合
            2.1.3 整合測序數(shù)據(jù)驗證
            2.1.4 差異表達(dá)基因篩選
            2.1.5 差異基因功能注釋
            2.1.6 差異基因診斷效能分析
            2.1.7 TCGA數(shù)據(jù)庫驗證及生存分析
        2.2 免疫組化研究
            2.2.1 主要試劑和儀器
            2.2.2 實驗分組
            2.2.3 實驗方法
            2.2.4 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 從整合的數(shù)據(jù)集中篩選出差異表達(dá)基因
        3.2 差異表達(dá)基因的GO分析和KEGG分析
        3.3 DEGs的 PPI分析
        3.4 前五位上調(diào)和下調(diào)表達(dá)的基因的臨床價值
        3.5 免疫組化(IHC)對COL11A1,GJB2和CTRL在胰腺癌組織和癌旁組織的表達(dá)進(jìn)行驗證
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:GJB2 基因?qū)σ认侔┥飳W(xué)行為的影響及機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象
        2.3 實驗方法
            2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.2 細(xì)胞凍存
            2.3.3 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.3.4 細(xì)胞計數(shù)
            2.3.5 提取細(xì)胞蛋白
            2.3.6 Western-blot
            2.3.7 shRNA轉(zhuǎn)染
            2.3.8 篩選沉默基因和轉(zhuǎn)染陰性對照載體的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株
            2.3.9 Western blot檢測慢病毒感染目的細(xì)胞后GJB2蛋白表達(dá)
        2.4 細(xì)胞增殖實驗(CCK-8法)
        2.5 劃痕實驗
        2.6 Transwell分析
            2.6.1 Transwell遷移實驗
            2.6.2 Transwell侵襲實驗
        2.7 轉(zhuǎn)染后上皮-間質(zhì)指標(biāo)變化檢測
            2.7.1 Western blot
            2.7.2 免疫熒光實驗
    3 實驗結(jié)果
        3.1 慢病毒轉(zhuǎn)染結(jié)胰腺癌細(xì)胞的效果
        3.2 基因敲減效率檢測
        3.3 沉默GJB2基因?qū)σ认侔┘?xì)胞增殖的影響
        3.4 敲減GJB2對胰腺癌細(xì)胞侵襲和遷移的影響
        3.5 敲減GJB2 對胰腺癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響
        3.6 敲減GJB2對Wnt/beta-catenin信號通路和MAPK通路的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述 生物信息學(xué)分析方法及分析工具在癌癥研究中的應(yīng)用進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Emerging role of the KRAS-PDK1 axis in pancreatic cancer[J]. Riccardo Ferro,Marco Falasca.  World Journal of Gastroenterology. 2014(31)



本文編號：3235899