[目 的]膀胱癌是一個重要的全球公共衛(wèi)生問題,2018年全球范圍內(nèi)最新癌癥統(tǒng)計,膀胱癌的新發(fā)病率在惡性腫瘤中居第四位,病死率位居第八位。在我國,膀胱癌是最常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,其在逐漸影響我國居民的健康狀況。近年來越來越多的證據(jù)表明二甲雙胍不僅具有顯著的降糖作用,而且在多種類型癌癥中也發(fā)揮重要的抗腫瘤作用,該機制主要與AMPK的活化、降低m TOR信號通路和蛋白的表達相關(guān)。而自噬作為癌癥治療的潛在新靶點,其自噬相關(guān)的m TOR信號途徑,對于腫瘤細胞生長,增殖和存活均起著重要作用。所以該課題的研究可以為二甲雙胍在臨床泌尿系統(tǒng)腫瘤的預(yù)防和治療中提供理論基礎(chǔ)。[方法]采用膀胱癌細胞株BIU-87進行體外細胞實驗,用MTT 比色實驗檢測對不同濃度二甲雙胍在不同的作用時間BIU-87細胞的活力測定;采用透射電子顯微鏡（TEM）觀察不同濃度不同時間二甲雙胍處理組自噬體的形態(tài)及數(shù)量;采用細胞自噬染色檢測試劑盒（MDC法）應(yīng)用熒光顯微鏡檢測膀胱癌細胞自噬體形態(tài)及數(shù)量;Western blot法檢測不同濃度二甲雙胍作用6小時,12小時,24小時后自噬標志性蛋白LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ的表達。采用West... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１二甲雙胍對膀胱癌ＢＩＵ－８７細胞增殖活力的影響??

Ａｕｔｏｐｈａｇｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??（％?ｃｅｌｌ?ｖｏｕｌｕｍｅ）??〇６圈?Ｄ?１２ｈ???＊??圏?Ｃａ?２４ｈ??０．４－??〇＂＿ｉ?ｌｌ?ｌｌ?．１??Ｕ．Ｕ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??０?１０?２０?４０??Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ?（ｍ．Ｍ）??Ｄ．??圖３透射電鏡觀察二甲雙胍作用于膀胱癌細胞ＢＩＵ－８７的自噬體情況??圖Ａ為不同濃度（ＯｍＭ，ｌＯｍＭ，２０ｍＭ，４０ｍＭ）二甲雙胍分別作用于膀脫癌細胞??１２ｈ，２４ｈ后自噬體的表達情況；圖Ｂ，?Ｃ，Ｄ為對照姐及實驗組分別作用不同時間??１２ｈ，２４ｈ的自噬體占細胞總數(shù)百分比的情況，與對照組相比，＊：ｐ＜０．０５，?＊＊＊＊：ｐ＜??０．０００１，Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ?為二甲雙胍。??４．?ＭＤＣ熒光染色檢測自噬體??ＭＤＣ熒光染色檢測自噬體作為自噬體檢測的非特異性檢測方法。不同濃度??（０ｍＭ、１０ｍＭ，２０ｍＭ，４０ｍＭ）二甲雙胍分別作用于人膀胱癌細胞１２ｈ，２４ｈ，收集??各組細胞，采用ＭＤＣ自噬熒光染色試劑盒進行染色，用熒光顯微鏡觀察自噬體??的形成，及自噬體數(shù)量、形態(tài)及大小并采集圖像（見圖４－Ａ＞?，并分別計數(shù)對照??組及實驗組作用于人膀胱癌細胞１２ｈ，２４ｈ的自噬體數(shù)量（見圖４－Ｂ，４－Ｃ）。實驗??結(jié)果顯示：與對照組相比，隨著二甲雙胍的濃度不斷增加，自噬體形成的數(shù)量亦??明顯增加，且呈濃度依賴性。??２７??

蛋白灰度值分析??１．６??ｌｌ．?ｉ［?．Ｉ．?．１．?ｌｌ．?．９．??０?２４ｈ?０?４８ｈ?１０?２４ｈ?１０４８ｈ?２０?２４ｈ?２０４８ｈ??■樣品名稱Ｐ＿ｐ７〇ｓ６ｋ?■樣品名稱ｐ－４ＥＢＰｌ?■樣品名稱ｐ－ＡＫＴ??ｃ．??圖５二甲雙胍誘導(dǎo)膀胱癌細胞的自噬相關(guān)通路下游蛋白的表達情況??圖Ａ，Ｂ為Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測二甲雙胍作用于膀胱癌細胞的自噬信號通路ｍＴＯＲＣｌ??和ｍＴ０ＲＣ２途徑下游蛋白的表達情況；圖Ｃ，為Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測二甲雙胍作用??于膀胱癌細胞的自噬信號通路下游蛋白灰度值分析圖。Ｍｅｔ為二甲雙胍。??３０??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Autophagy in cerebral ischemia and the effects of traditional Chinese medicine[J]. Xiao-ping Huang,Huang Ding,Jin-dong Lu,Ying-hong Tang,Bing-xiang Deng,Chang-qing Deng.  Journal of Integrative Medicine. 2015(05)



本文編號：3234083