背景與目的:膽管癌是起源于膽管上皮細胞的惡性腫瘤,其特征是早期診斷困難并且預后不良。本論文前期基于iTRAQ蛋白質組學技術和HCS增殖篩選實驗發(fā)現(xiàn)RPS6在膽管癌組織中高表達,并且沉默RPS6能夠顯著抑制膽管細胞的增殖,有研究發(fā)現(xiàn)RPS6在多種腫瘤中異常高表達。鑒于RPS6在膽管癌發(fā)生發(fā)展中體現(xiàn)出潛在的調節(jié)作用,進一步研究其生物學功能及與膽管癌的關系,將為膽管癌患者的預后評估和分子靶向治療提供理論依據。本研究旨在分析RPS6在膽管癌患者組織中表達情況與患者預后的關系,探討RPS6調控膽管癌細胞增殖的分子生物學機制。方法:利用iTRAQ蛋白質組學鑒定膽管癌患者癌組織與癌旁組織的蛋白譜變化,挑選20個差異蛋白并通過高內涵增殖實驗篩選顯著抑制膽管癌細胞增殖的基因RPS6。利用免疫組織化學法對組織芯片中包含的91例膽管癌患者及31例癌旁組織進行染色,分析RPS6及其磷酸化形式p-RPS6在膽管癌中的表達情況并進行生存分析。構建慢病毒干擾質粒,通過qRT-PCR及Western Blotting驗證敲低效果,CCK-8細胞增殖實驗驗證敲低RPS6對膽管癌細胞生長的抑制效果,最后利用轉錄組學高通量... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

-1GV248慢病毒載體結構示意圖

蘭州大學碩士學位論文RPS6在膽管癌中的作用及機制研究24第三章實驗結果與結論3.1膽管癌組織差異蛋白分析本實驗應用基于iTRAQ的蛋白質組學分析的研究策略構建膽管癌組織差異蛋白譜，在膽管癌患者癌與癌旁組織中共檢測到2381個可信蛋白，其中差異蛋白共786個，差異蛋白的表達模式聚類熱圖分析如圖3-1-1所示。圖3-1-1基于R語言進行表達模式聚類熱圖分析差異蛋白進行聚類熱圖分析顯示，圖中最下側為差異蛋白名稱，其中紅色為上調差異蛋白，綠色為下調差異蛋白，差異倍數越高，顏色越深。每行表示不同蛋白在每個組中的表達量情況，每列表示相同蛋白在不同組中的表達量情況。T：腫瘤組織，N：癌旁組織。然后對差異蛋白進行韋恩分析（圖3-1-2），在786個差異蛋白中，2組以上共有的差異蛋白為339個，3組共同的差異蛋白為96個。在96個差異蛋白中，通過KEGG分析和文獻追蹤，挑選可能影響癌癥發(fā)生發(fā)展的20個差異蛋白，差異蛋白基本信息及利用iTRAQ檢測到的信息如下表3-1-1所示。圖3-1-2膽管癌癌與癌旁組織差異蛋白韋恩圖T1：N1T2：N2T3：N3

蘭州大學碩士學位論文RPS6在膽管癌中的作用及機制研究24第三章實驗結果與結論3.1膽管癌組織差異蛋白分析本實驗應用基于iTRAQ的蛋白質組學分析的研究策略構建膽管癌組織差異蛋白譜，在膽管癌患者癌與癌旁組織中共檢測到2381個可信蛋白，其中差異蛋白共786個，差異蛋白的表達模式聚類熱圖分析如圖3-1-1所示。圖3-1-1基于R語言進行表達模式聚類熱圖分析差異蛋白進行聚類熱圖分析顯示，圖中最下側為差異蛋白名稱，其中紅色為上調差異蛋白，綠色為下調差異蛋白，差異倍數越高，顏色越深。每行表示不同蛋白在每個組中的表達量情況，每列表示相同蛋白在不同組中的表達量情況。T：腫瘤組織，N：癌旁組織。然后對差異蛋白進行韋恩分析（圖3-1-2），在786個差異蛋白中，2組以上共有的差異蛋白為339個，3組共同的差異蛋白為96個。在96個差異蛋白中，通過KEGG分析和文獻追蹤，挑選可能影響癌癥發(fā)生發(fā)展的20個差異蛋白，差異蛋白基本信息及利用iTRAQ檢測到的信息如下表3-1-1所示。圖3-1-2膽管癌癌與癌旁組織差異蛋白韋恩圖T1：N1T2：N2T3：N3


本文編號：3221779