目的:研究IDH1在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的突變頻率,突變類型,預(yù)后意義,分析IDH1突變與臨床病理特征之間的聯(lián)系。方法:我們收集了從2009年到2014年在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院肝臟外科行肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌手術(shù)的85例標(biāo)本。通過測(cè)序檢測(cè)IDH1的突變狀態(tài),對(duì)患者術(shù)后生存狀況進(jìn)行隨訪,收集并分析患者的臨床病理特征。免疫組化檢測(cè)腫瘤樣本中ki-67的表達(dá)水平。結(jié)果:通過測(cè)序我們發(fā)現(xiàn)在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中存在約15%左右的IDH1突變。相對(duì)于野生型的患者,IDH1突變的患者有著更高的總體生存率和較低的術(shù)后復(fù)發(fā)率。IDH1突變與較小的腫瘤大小,較低的CA19-9水平和較早的TNM分期具有顯著性相關(guān)。IDH1突變的樣本中ki-67陽(yáng)性率較低。結(jié)論:IDH1突變的肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者具有較好的預(yù)后。目的:研究IDH1對(duì)肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌生長(zhǎng)功能的影響及機(jī)制。方法:利用病毒載體,我們建立了穩(wěn)定表達(dá)野生型和5種突變型IDH1的肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞系。通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn),細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn),裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)及皮下瘤ki-67染色實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)能力變化。Western Blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)一些... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：117 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

IDH1擴(kuò)增區(qū)域序列

圖 2 IDH1 擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖。產(chǎn)樣品。2.4.3 Sanger 測(cè)序所有的測(cè)序工作均委托武漢擎科創(chuàng)新后，將條帶清晰的樣本（副孔中的另一管2.5 免疫組織化學(xué)染色1）將組織切片放于 60 度烤箱中半小2）將切片從烤箱迅速轉(zhuǎn)移到二甲苯溶同時(shí)間，依次轉(zhuǎn)入不同濃度乙醇，100%，3）將水化后的切片用預(yù)先配置好的 P如下：

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文總體積 20μL反應(yīng)條件：預(yù)變性 98 度 2 分鐘變性 98 度 10 秒退火 15 秒*延伸 72 度 45 秒終延伸 72 度 5 分鐘*采用溫度梯度 PCR 儀（thermo），退火溫度設(shè)置 60,65,70 三個(gè)溫度梯度。反應(yīng)結(jié)束后，每管加入 63的上樣緩沖液 4ul，行瓊脂糖凝膠電泳鑒定，方法第一部分。


本文編號(hào)：3217499