研究背景:膽囊癌（Gallbladder Cancer,GC）是一種膽系原發(fā)性惡性腫瘤,在臨床上十分常見。因其惡性程度較高,癌癥細(xì)胞生長速度快,患此病的患者預(yù)后都很差。又由于膽囊癌往往在患者確診前就有很大可能出現(xiàn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,使得患者接受手術(shù)切除的治療手段后,極易復(fù)發(fā)。且患者手術(shù)切除后,5年生存率也相較于其他癌癥較低,僅有2%-5%。另外,膽囊癌細(xì)胞對化療藥物不是十分敏感,采用放射治療對膽囊癌疾病進(jìn)行輔助治療也很難取得顯著的療效。因此,目前臨床上迫切需要研究和發(fā)展新的膽囊癌治療方法,而基因治療成為了科學(xué)家們所關(guān)注的焦點(diǎn)。其中siRNA采用與癌癥細(xì)胞中的目標(biāo)基因的反義核苷酸鏈,通過堿基互補(bǔ)的效應(yīng)來達(dá)到抑制mRNA翻譯/合成蛋白質(zhì)的目的,從而在表觀遺傳學(xué)的層面沉默了目標(biāo)基因的表達(dá),目前該策略已經(jīng)成為研究癌癥基因治療的一種常用策略,其中癌癥相關(guān)基因EIF5A2基因已經(jīng)在其他類型的癌癥上有較多研究,而關(guān)于膽囊癌的EIF5A2基因的研究則鮮有報道。[目 的]采用iRNA技術(shù),將靶向siRNA干擾片段轉(zhuǎn)入進(jìn)膽囊癌GBC-SD細(xì)胞系中,從而抑制EIF5A2基因的表達(dá),通過Western Blot技術(shù)... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞與ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞ＥＩＦ５Ａ２相對表達(dá)量??轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ的ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞在轉(zhuǎn)染２４ｈ后，其ＥＩＦ５Ａ２基因的相對表達(dá)量??

ｊ?Ｊ??ＧＢＣ－ＳＤ?ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ??ＥＩＦ５Ａ２??？?＾?＾?＇?？＜，?ｉｉ?：－ｉ．？?．ｉｂ＇：篇越知綠匕轅??ｐ－ａｃｔｉｎ??圖３－２?ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞與ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞ＥＩＦ５Ａ２基因的蛋白表達(dá)情況??轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ的ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞在轉(zhuǎn)染４８ｈ后，其ＥＩＦ５Ａ２基因編碼蛋白的能??力明顯受到了抑制，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的條帶較弱，而未轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ的ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞??在培養(yǎng)４８ｈ后ＥＩＦ５Ａ２編碼蛋白相對正常。從圖３－２中可以明顯看出，轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ??的ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞相較于未轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ的ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞，其ＥＩＦ５Ａ２基因表達(dá)蛋??白的水平明顯降低。??１．?３?ｓｉＲＮＡ對ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞系的增殖影響??在驗(yàn)證ｓｉＲＮＡ對ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞的增殖影響前，首先繪制了?ＣＣＫ８工作曲線：??ｙ?＝?６Ｘ１０６ｘ?＋?０．１３８５；?Ｒ２?＝?０．８７６２??在轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ?Ｏｈ后，ＧＢＣ－ＳＤ與ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ的Ａ４５０吸光度值無明顯??統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＝０．７３２）。在轉(zhuǎn)染?ｓｉＲＮＡ?］２ｈ?后，ＧＢＣ－ＳＤ?與?ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ?的??Ａ４５０吸光度值同樣也無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＝０．１７２）。而在轉(zhuǎn)染２４ｈ，３６ｈ以及４８ｈ??后，ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞與ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞的Ａ４５０吸光度值出現(xiàn)了明顯的差異，??其中Ｐ值分別為０．０１３，?０．００９，?０．００３，均小于０．０５。如圖３－３所示：??０．３５?????０．３」???????°－２５＾???５?０．２?丄——??Ｓ?０．１５??

ｊ?Ｊ??ＧＢＣ－ＳＤ?ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ??ＥＩＦ５Ａ２??？?＾?＾?＇?？＜，?ｉｉ?：－ｉ．？?．ｉｂ＇：篇越知綠匕轅??ｐ－ａｃｔｉｎ??圖３－２?ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞與ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞ＥＩＦ５Ａ２基因的蛋白表達(dá)情況??轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ的ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞在轉(zhuǎn)染４８ｈ后，其ＥＩＦ５Ａ２基因編碼蛋白的能??力明顯受到了抑制，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的條帶較弱，而未轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ的ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞??在培養(yǎng)４８ｈ后ＥＩＦ５Ａ２編碼蛋白相對正常。從圖３－２中可以明顯看出，轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ??的ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞相較于未轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ的ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞，其ＥＩＦ５Ａ２基因表達(dá)蛋??白的水平明顯降低。??１．?３?ｓｉＲＮＡ對ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞系的增殖影響??在驗(yàn)證ｓｉＲＮＡ對ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞的增殖影響前，首先繪制了?ＣＣＫ８工作曲線：??ｙ?＝?６Ｘ１０６ｘ?＋?０．１３８５；?Ｒ２?＝?０．８７６２??在轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ?Ｏｈ后，ＧＢＣ－ＳＤ與ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ的Ａ４５０吸光度值無明顯??統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＝０．７３２）。在轉(zhuǎn)染?ｓｉＲＮＡ?］２ｈ?后，ＧＢＣ－ＳＤ?與?ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ?的??Ａ４５０吸光度值同樣也無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＝０．１７２）。而在轉(zhuǎn)染２４ｈ，３６ｈ以及４８ｈ??后，ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞與ｓｉＲＮＡ－ＧＢＣ－ＳＤ細(xì)胞的Ａ４５０吸光度值出現(xiàn)了明顯的差異，??其中Ｐ值分別為０．０１３，?０．００９，?０．００３，均小于０．０５。如圖３－３所示：??０．３５?????０．３」???????°－２５＾???５?０．２?丄——??Ｓ?０．１５??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1在原發(fā)性膽囊癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 姜文霞,宋伯根,湯如勇,方建萍.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2006(10)
[2]我國膽囊癌的發(fā)病情況及外科處理[J]. 石景森.  肝膽胰外科雜志. 1999(01)

碩士論文
[1]EIF-5A2蛋白在膽囊癌組織中的表達(dá)和臨床分析[D]. 許丁偉.昆明醫(yī)科大學(xué) 2015



本文編號：3212830