發(fā)布時間：2021-06-05 17:39

　　胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一,我國是胃癌高發(fā)區(qū),因人口基數(shù)較大,胃癌人群數(shù)量居全球首位。并且男性比女性發(fā)病率高,進展快。但是早期胃癌的診斷水平低下,以致患者沒有得到及時治療而喪失生命。因此,尋找一種新的早期胃癌診斷方法有很重要的意義。胃癌的發(fā)生會伴隨著體內(nèi)代謝紊亂,如氨基酸代謝、糖酵解途徑、三羧酸循環(huán)等能量代謝異常。本論文基于UHPLC-MS/MS技術(shù),對胃癌MGC-803細(xì)胞及經(jīng)雄、雌激素刺激的MGC-803細(xì)胞中氨基酸、糖酵解、三羧酸循環(huán)等進行代謝組學(xué)分析,并且對24種氨基酸進行絕對定量分析,具體研究內(nèi)容如下。一、建立了MGC-803細(xì)胞中氨基酸、糖類及有機酸代謝的UHPLC-MS/MS分析方法（1）建立了細(xì)胞樣品前處理方法,通過對細(xì)胞收集、淬滅、洗滌溶劑、提取溶劑、破碎方法等優(yōu)化,最終確定了一套系統(tǒng)的細(xì)胞樣品前處理方法。（2）建立了氨基酸、糖類物質(zhì)及有機酸的液相色譜、質(zhì)譜分析條件。采用UPLC BEH Amide（1.7μm,2.1×100 mm,Waters）色譜柱,梯度洗脫,運行時間45 min。質(zhì)譜條件:電噴霧離子化（ESI）,正、負(fù)離子分別檢測,采用多反應(yīng)離子監(jiān)測（MR... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同胃癌細(xì)胞MGC-803樣品總離子流圖

圖 2. 2 分析物峰面積的日間精密度2.3.3 主成分分析本實驗通過 LC-MS 采集得到細(xì)胞樣本的總離子流圖，將其結(jié)果通過MultiQuantTM3.0 軟件進行處理，將正、負(fù)離子模式下的代謝物合并，導(dǎo)入到MarkerView1.2.1 軟件進行主成分分析（PCA）進行分析，其得分圖（score plot）如圖 2.3 所示，圖中每個點都代表一個樣本，從圖中可以看出所有的樣本分成 3個范圍，同一組的樣本在同一個范圍。因為這些樣本的位置是由于代謝物的特點決定的，所有的胃癌細(xì)胞或經(jīng)雄、雌激素刺激的細(xì)胞樣本，生理病理狀態(tài)相似，所以每組樣本具有相似的代謝物組成，在得分圖上也處在比較相似的位置，樣本之間距離越遠代表兩組之間的代謝物差異越大，反應(yīng)的細(xì)胞樣品之間生理狀態(tài)相差越大。在總得分圖上可以看到，胃癌 MGC-803 細(xì)胞與經(jīng)雄、雌激素刺激的細(xì)胞之間能較好的分離開來，并且組內(nèi)的差異都相對較小。QC 樣本的分布比較集中，說明在檢測樣本過程中，儀器響應(yīng)穩(wěn)定。

如圖 2.1。圖 2. 1 不同胃癌細(xì)胞 MGC-803 樣品總離子流圖2.3.2 儀器穩(wěn)定性對質(zhì)控樣品（QC）進行檢測，連續(xù)測定 3 天，對待測物的峰面積和保留時間進行日內(nèi)、日間精密度分析。保留時間的日內(nèi)、日間 RSD%值在 5%以內(nèi)；峰面積的 RSD%在 20%以內(nèi)的有 92%以上，說明儀器穩(wěn)定。95 個待測物峰面積的RSD%在各范圍的比例，如圖 2.2。

【參考文獻】：
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本文編號：3212611