迄今為止,越來越多的證據(jù)表明,microRNA的表達(dá)失調(diào)和甲狀腺癌等多種危害較大的腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。據(jù)多個研究報(bào)道,microRNA家族成員之一的miR-338-3p參與了非小細(xì)胞肺癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種惡性腫瘤的發(fā)生過程。但是miR-338-3p是否也參與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移以及其參與調(diào)節(jié)的具體機(jī)制還遠(yuǎn)未闡明。本研究運(yùn)用分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和動物學(xué)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)來研究miR-338-3p在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果分以下六部分。1在甲狀腺乳頭狀癌組織和甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞系中miR-338-3p的表達(dá)顯著下調(diào)。熒光實(shí)時定量PCR（qRT-PCR）結(jié)果顯示,與癌旁的正常組織（adjacent noncancerous tissues,ANT）相比,miR-338-3p在甲狀腺腫瘤組織中的表達(dá)明顯下調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p<0.01,上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示miR-338-3p參與了甲狀腺腫瘤的發(fā)生過程。同時,我們的結(jié)果提示miR-338-3p的表達(dá)水平與甲狀腺腫瘤的TNM分期相關(guān)明顯,甲狀腺腫瘤分期越高,miR-338-3p的表達(dá)值越低。另外,在甲狀腺... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
第1章 綜述
    1.1 microRNA概述
    1.2 甲狀腺癌
    1.3 甲狀腺癌和MICRORNA的關(guān)系
        1.3.1 microRNA與PTC的關(guān)系
        1.3.2 microRNA與FTC的關(guān)系
        1.3.3 microRNA與ATC的關(guān)系
        1.3.4 microRNA與PDTC的關(guān)系
        1.3.5 microRNA與MTC的關(guān)系
        1.3.6 microRNA的合成關(guān)鍵蛋白和甲狀腺腫瘤的關(guān)系
        1.3.7 甲狀腺癌患者循環(huán)系統(tǒng)中microRNA的價值
        1.3.8 microRNA在甲狀腺癌中的診斷價值
        1.3.9 microRNA在甲狀腺癌中的篩查和判斷治療效果中價值：
    1.4 總結(jié)
第2章 材料和方法
    2.1 倫理審核
    2.2 患者資料和標(biāo)本收集
    2.3 所用細(xì)胞系的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.3.2 所用細(xì)胞系的培養(yǎng)及傳代
        2.3.3 細(xì)胞凍存
        2.3.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3.5 化學(xué)合成microRNAs以及轉(zhuǎn)染
    2.4 定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)步驟
        2.4.1 試劑和器具的處理方法
        2.4.2 總RNA提取
        2.4.3 電泳分析總RNA
        2.4.4 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)步驟
        2.4.5 Real-time PCR
        2.4.6 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
    2.5 TPC-1 甲狀腺癌細(xì)胞活性以及克隆能力的測定
        2.5.1 MTT法檢測細(xì)胞活性
        2.5.2 TPC-1 甲狀腺癌細(xì)胞克隆能力檢測
    2.6 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)/劃傷模型
    2.7 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
    2.8 熒光報(bào)告質(zhì)粒構(gòu)建
        2.8.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.8.2 所需溶液和試劑的配置
        2.8.3 目的片段PCR擴(kuò)增
        2.8.4 質(zhì)粒載體以及PCR產(chǎn)物的雙酶切鑒定及凝膠回收
        2.8.5 粘性末端的連接
        2.8.6 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化
        2.8.7 質(zhì)粒DNA的小量提取
        2.8.8 酶切鑒定
        2.8.9 質(zhì)粒大量提取
        2.8.10 紫外分光光度計(jì)定量
        2.8.11 點(diǎn)突變質(zhì)粒載體的構(gòu)建
    2.9 熒光報(bào)告系統(tǒng)檢測
    2.10 Western blot實(shí)驗(yàn)步驟
        2.10.1 主要試劑和溶液的配置
        2.10.2 細(xì)胞總蛋白的提取
        2.10.3 組織總蛋白提取
        2.10.4 實(shí)驗(yàn)步驟
    2.11 小鼠移植瘤模型構(gòu)建
        2.11.1 實(shí)驗(yàn)動物購置
        2.11.2 小鼠移植瘤模型構(gòu)建步驟
    2.12 材料和儀器
        2.12.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.12.2 主要儀器和材料
    2.13 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)
第3章 結(jié)果
    3.1 在甲狀腺乳頭狀癌組織和甲狀腺腫瘤細(xì)胞系中miR3383p的表達(dá)顯著下調(diào)
    3.2 體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR3383p可以抑制甲狀腺乳頭狀癌的生長
    3.3 miR3383P可以抑制甲狀腺乳頭狀癌的侵襲和轉(zhuǎn)移
    3.4 AKT3是miR3383p的調(diào)控靶點(diǎn)
    3.5 AKT3可以促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展
    3.6 AKT3可以部分逆轉(zhuǎn)miR3383p對甲狀腺乳頭狀癌的抑制作用
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Use of thyroglobulin as a tumour marker[J]. Buddhike Sri Harsha Indrasena.  World Journal of Biological Chemistry. 2017(01)



本文編號：3205108