前列腺癌（Prostate cancer）是一種男性高發(fā)的惡性腫瘤,該病的患病率在全世界規(guī)模內(nèi)占據(jù)男性易患腫瘤的第二位,其死亡率位居第六。早期前列腺癌可通過(guò)手術(shù)進(jìn)行去勢(shì)治療,但大多數(shù)患者在治療不久后會(huì)轉(zhuǎn)變成去勢(shì)抗性前列腺癌,這不僅增加了治療的難度同時(shí)也提高了死亡率。因此探究前列腺癌的產(chǎn)生以及發(fā)展機(jī)制,找尋新的基因靶標(biāo)和藥物抑制劑,對(duì)于人類的健康以及患者壽命的延長(zhǎng)至關(guān)重要。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),一種Ca²⁺激活氯離子通道TMEM16A基因表達(dá)的變化可以參與前列腺癌的某些生物學(xué)功能的調(diào)控,但對(duì)于其調(diào)控的方式以及具體機(jī)制仍存在爭(zhēng)議。TMEM16A（ANO1）是Anoctamin家族成員之一。該基因位于人類染色體11q13的CCND1-EMS1區(qū)域,此區(qū)域是腫瘤擴(kuò)增區(qū)域,多種癌癥的發(fā)生與該區(qū)域的擴(kuò)增緊密相關(guān)。因此,TMEM16A可作為在前列腺癌研究中的重點(diǎn)對(duì)象之一。本論文選擇了人的前列腺癌細(xì)胞系PC-3、LNCap、DU145以及前列腺上皮細(xì)胞RWPE-1,通過(guò)q PCR實(shí)驗(yàn)、免疫細(xì)胞化學(xué)以及Western Blot實(shí)驗(yàn)對(duì)TMEM16A在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行分析;利用免疫... 

【文章來(lái)源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 前列腺癌概述
        1.1.1 前列腺癌發(fā)生發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)因素
        1.1.2 前列腺癌的診斷
        1.1.3 前列腺癌的治療方法
        1.1.4 前列腺癌常見(jiàn)的腫瘤標(biāo)志物
        1.1.5 前列腺癌細(xì)胞系的研究進(jìn)展
    1.2 Ca~(2+)激活氯離子通道TMEM16A
        1.2.1 TMEM16家族的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 TMEM16家族的功能
        1.2.3 TMEM16A的結(jié)構(gòu)
        1.2.4 TMEM16A 蛋白的功能研究
        1.2.5 Ca CCs 抑制劑的研究進(jìn)展
        1.2.6 TMEM16A在癌癥中的研究進(jìn)展
    1.3 本論文研究的目的和意義
2 TMEM16A 在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)及定位
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中的TMEM16A
        2.2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)
        2.2.3 免疫熒光檢測(cè)TMEM16A的表達(dá)定位
        2.2.4 蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)細(xì)胞中的TMEM16A
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 TMEM16A在前列腺癌細(xì)胞中mRNA水平上的表達(dá)情況
        2.3.2 TMEM16A 在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)定位情況
        2.3.3 TMEM16A在前列腺癌細(xì)胞中蛋白水平上的表達(dá)情況
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 TMEM16A的表達(dá)在前列腺癌細(xì)胞增殖和遷移中的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖活力
        3.2.2 劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞的遷移
        3.2.3 Transwell檢測(cè)細(xì)胞的遷移
        3.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 藥理學(xué)抑制TMEM16A的活性對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖的影響
        3.3.2 藥理學(xué)抑制TMEM16A的活性對(duì)前列腺癌細(xì)胞遷移的影響
        3.3.3 si RNA干擾TMEM16A的表達(dá)對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖和遷移的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 TMEM16A在雄激素DHT參與下對(duì)前列腺癌細(xì)胞LNCap增殖和遷移的探究
    4.1 主要實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 qPCR檢測(cè)TMEM16A在 LNCap細(xì)胞中的表達(dá)
        4.2.2 WB檢測(cè)TMEM16A在 LNCap細(xì)胞中的表達(dá)
        4.2.3 CCK-8 檢測(cè)LNCap細(xì)胞的增殖活力
        4.2.4 劃痕實(shí)驗(yàn)觀察LNCap細(xì)胞的遷移
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 DHT作用于LNCap細(xì)胞后TMEM16A在 mRNA水平上的表達(dá)情況
        4.3.2 DHT作用于LNCap細(xì)胞后TMEM16A在蛋白水平上的表達(dá)情況
        4.3.3 藥理學(xué)抑制對(duì)DHT參與LNCap細(xì)胞增殖的影響
        4.3.4 藥理學(xué)抑制對(duì)DHT參與LNCap細(xì)胞遷移的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 TMEM16A參與前列腺癌細(xì)胞增殖和遷移相關(guān)信號(hào)通路的初探
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 PC-3細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        5.2.2 蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 TMEM16A 的表達(dá)對(duì)參與 NF-κB 通路相關(guān)增殖和遷移基因在蛋白水平上的影響
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
結(jié)論
本論文的創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]去勢(shì)抵抗性前列腺癌的治療[J]. 吳楠,童本定,魏青.  藥學(xué)與臨床研究. 2015(05)
[2]三種常見(jiàn)的前列腺癌細(xì)胞系LNCap、PC3和DU145的生物學(xué)特性[J]. 林艷端,申鍔,胡兵.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2013(11)
[3]TMEM16/ANOCTAMIN:最新的氯通道家族[J]. 吳鵬,王明曉,欒海艷,李麗麗,谷瑞民.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2011(04)
[4]前列腺癌標(biāo)志物的新進(jìn)展[J]. 孫學(xué)健,王金良.  醫(yī)學(xué)綜述. 2009(16)
[5]前列腺癌標(biāo)志物與年齡及膳食結(jié)構(gòu)關(guān)系[J]. 楊國(guó)平,吳益民,王洪軍,孫艷,董玉,尹旭輝,張志強(qiáng),馮立.  中國(guó)公共衛(wèi)生. 2008(05)



本文編號(hào)：3195294