前列腺癌（Prostate cancer）是一種男性高發(fā)的惡性腫瘤,該病的患病率在全世界規(guī)模內(nèi)占據(jù)男性易患腫瘤的第二位,其死亡率位居第六。早期前列腺癌可通過手術(shù)進行去勢治療,但大多數(shù)患者在治療不久后會轉(zhuǎn)變成去勢抗性前列腺癌,這不僅增加了治療的難度同時也提高了死亡率。因此探究前列腺癌的產(chǎn)生以及發(fā)展機制,找尋新的基因靶標和藥物抑制劑,對于人類的健康以及患者壽命的延長至關(guān)重要。近年來的研究發(fā)現(xiàn),一種Ca²⁺激活氯離子通道TMEM16A基因表達的變化可以參與前列腺癌的某些生物學功能的調(diào)控,但對于其調(diào)控的方式以及具體機制仍存在爭議。TMEM16A（ANO1）是Anoctamin家族成員之一。該基因位于人類染色體11q13的CCND1-EMS1區(qū)域,此區(qū)域是腫瘤擴增區(qū)域,多種癌癥的發(fā)生與該區(qū)域的擴增緊密相關(guān)。因此,TMEM16A可作為在前列腺癌研究中的重點對象之一。本論文選擇了人的前列腺癌細胞系PC-3、LNCap、DU145以及前列腺上皮細胞RWPE-1,通過q PCR實驗、免疫細胞化學以及Western Blot實驗對TMEM16A在前列腺癌細胞中的表達進行分析;利用免疫... 

【文章來源】：遼寧師范大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 前列腺癌概述
        1.1.1 前列腺癌發(fā)生發(fā)展的風險因素
        1.1.2 前列腺癌的診斷
        1.1.3 前列腺癌的治療方法
        1.1.4 前列腺癌常見的腫瘤標志物
        1.1.5 前列腺癌細胞系的研究進展
    1.2 Ca~(2+)激活氯離子通道TMEM16A
        1.2.1 TMEM16家族的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 TMEM16家族的功能
        1.2.3 TMEM16A的結(jié)構(gòu)
        1.2.4 TMEM16A 蛋白的功能研究
        1.2.5 Ca CCs 抑制劑的研究進展
        1.2.6 TMEM16A在癌癥中的研究進展
    1.3 本論文研究的目的和意義
2 TMEM16A 在前列腺癌細胞中表達及定位
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要實驗材料
        2.1.2 主要實驗試劑
        2.1.3 主要實驗設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 實時熒光定量PCR檢測細胞中的TMEM16A
        2.2.2 免疫細胞化學
        2.2.3 免疫熒光檢測TMEM16A的表達定位
        2.2.4 蛋白質(zhì)免疫印跡檢測細胞中的TMEM16A
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 TMEM16A在前列腺癌細胞中mRNA水平上的表達情況
        2.3.2 TMEM16A 在前列腺癌細胞中的表達定位情況
        2.3.3 TMEM16A在前列腺癌細胞中蛋白水平上的表達情況
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 TMEM16A的表達在前列腺癌細胞增殖和遷移中的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 主要實驗材料
        3.1.2 主要實驗試劑
        3.1.3 主要實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 CCK-8檢測細胞增殖活力
        3.2.2 劃痕實驗觀察細胞的遷移
        3.2.3 Transwell檢測細胞的遷移
        3.2.4 細胞轉(zhuǎn)染
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 藥理學抑制TMEM16A的活性對前列腺癌細胞增殖的影響
        3.3.2 藥理學抑制TMEM16A的活性對前列腺癌細胞遷移的影響
        3.3.3 si RNA干擾TMEM16A的表達對前列腺癌細胞增殖和遷移的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 TMEM16A在雄激素DHT參與下對前列腺癌細胞LNCap增殖和遷移的探究
    4.1 主要實驗材料與試劑
        4.1.1 主要實驗材料
        4.1.2 主要實驗試劑
        4.1.3 主要實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 qPCR檢測TMEM16A在 LNCap細胞中的表達
        4.2.2 WB檢測TMEM16A在 LNCap細胞中的表達
        4.2.3 CCK-8 檢測LNCap細胞的增殖活力
        4.2.4 劃痕實驗觀察LNCap細胞的遷移
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 DHT作用于LNCap細胞后TMEM16A在 mRNA水平上的表達情況
        4.3.2 DHT作用于LNCap細胞后TMEM16A在蛋白水平上的表達情況
        4.3.3 藥理學抑制對DHT參與LNCap細胞增殖的影響
        4.3.4 藥理學抑制對DHT參與LNCap細胞遷移的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 TMEM16A參與前列腺癌細胞增殖和遷移相關(guān)信號通路的初探
    5.1 實驗材料
        5.1.1 主要實驗材料
        5.1.2 主要實驗試劑
        5.1.3 主要實驗儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 PC-3細胞的轉(zhuǎn)染
        5.2.2 蛋白質(zhì)免疫印跡實驗
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 TMEM16A 的表達對參與 NF-κB 通路相關(guān)增殖和遷移基因在蛋白水平上的影響
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
結(jié)論
本論文的創(chuàng)新點
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表學術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]去勢抵抗性前列腺癌的治療[J]. 吳楠,童本定,魏青.  藥學與臨床研究. 2015(05)
[2]三種常見的前列腺癌細胞系LNCap、PC3和DU145的生物學特性[J]. 林艷端,申鍔,胡兵.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2013(11)
[3]TMEM16/ANOCTAMIN:最新的氯通道家族[J]. 吳鵬,王明曉,欒海艷,李麗麗,谷瑞民.  生理科學進展. 2011(04)
[4]前列腺癌標志物的新進展[J]. 孫學健,王金良.  醫(yī)學綜述. 2009(16)
[5]前列腺癌標志物與年齡及膳食結(jié)構(gòu)關(guān)系[J]. 楊國平,吳益民,王洪軍,孫艷,董玉,尹旭輝,張志強,馮立.  中國公共衛(wèi)生. 2008(05)



本文編號：3195294