目的為了建立高效、敏感的針對(duì)重組溶瘤2型單純皰疹病毒（oHSV2）的熒光定量PCR方法。方法依據(jù)oHSV2的基因序列,登錄Beacon Designer 8.0軟件設(shè)計(jì)引物,提取前期已重組好的陽(yáng)性質(zhì)粒pHG52d34.5CMVhGM-CSF,測(cè)定濃度并換算后梯度稀釋為熒光定量PCR的模板,進(jìn)行PCR反應(yīng)。結(jié)果經(jīng)過(guò)多次調(diào)整實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)條件和反應(yīng)體系,熔解曲線為單一峰,該病毒與野生型Ⅰ型單純皰疹病毒、野生型Ⅱ型單純皰疹病毒等沒(méi)有交叉反應(yīng)。oHSV2最低檢測(cè)限為1000 copies/μL,R²可達(dá)0.997,批內(nèi)及批間變異系數(shù)分別為0.357%～1.156%和1.06%～3.35%,體液（血液）中預(yù)加的oHSV2的回收率為96.6%～109.3%。結(jié)論成功建立了oHSV2的SYBR Green實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,可特異而靈敏地檢測(cè)血漿中的oHSV2。 

【文章來(lái)源】：湖北科技學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2020,34(02)

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌液及模擬臨床樣本
        1.1.2 主要試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        1.2.2 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        1.2.3 PCR方法的建立
            (1)SYBR Green熒光定量PCR反應(yīng)體系的建立及優(yōu)化
            (2)實(shí)時(shí)定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            (3)特異性試驗(yàn)
            (4)敏感性試驗(yàn)
            (5)重復(fù)性試驗(yàn)
            (6)熒光定量PCR檢測(cè)方法的驗(yàn)證
2 結(jié)果與分析
    2.1 SYBR Green real-time PCR最佳反應(yīng)條件與反應(yīng)體系
    2.2 SYBR Green real-time PCR的建立
    2.3 SYBR Green real-time PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線
    2.4 熒光定量PCR方法的特異性結(jié)果
    2.5 熒光定量PCR方法的重復(fù)性評(píng)估
    2.6 驗(yàn)證結(jié)果
3 討 論



本文編號(hào)：3186449