目的:多發(fā)性骨髓瘤約占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10%,是第二大常見血液系統(tǒng)惡性腫瘤,以漿細(xì)胞惡性克隆性增生為表現(xiàn)形式,目前仍然屬于不可治愈的疾病。雖然目前隨著自體造血干細(xì)胞移植術(shù)、治療新藥的上市以及新型免疫療法的應(yīng)用,多發(fā)性骨髓瘤治療的療效和患者預(yù)后已得到明顯改善,5年總生存期得到明顯延長(zhǎng),但大多數(shù)患者最終仍然以復(fù)發(fā)為結(jié)局。影響多發(fā)性骨髓瘤的疾病進(jìn)展與預(yù)后的因素有很多,染色體異常、癌基因突變激活以及骨髓微環(huán)境的改變等都在多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病、進(jìn)展及預(yù)后中起關(guān)鍵作用。但目前尚無判斷疾病預(yù)后的理想分子指標(biāo),探索研究影響預(yù)后的因素是目前研究熱點(diǎn)。circRNA作為一類新型非編碼RNA,是一種共價(jià)閉合內(nèi)源性非編碼RNA。它既沒有5’末端和3’末端極性,也沒有PolyA尾,因此結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,并且不易被核酸內(nèi)切酶降解。circRNA具有組織和疾病特異性,在癌癥發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)功能,對(duì)circRNA的深入研究對(duì)揭示腫瘤發(fā)生發(fā)展具有重要意義。circRNA具有多種生物學(xué)功能,包括作為miRNA的“海綿”吸附miRNA、翻譯蛋白、調(diào)節(jié)RNA結(jié)合蛋白、調(diào)控親本基因表達(dá)等等。目前關(guān)于circRNA功能報(bào)道最多的... 

【文章來源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 :circ-CDYL判斷多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后的可行性研究
    1前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑及耗材
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 國(guó)際生物學(xué)信息途徑和計(jì)算機(jī)分析軟件包
        2.2 研究對(duì)象和分組
        2.3 研究方法
            2.3.1 免疫磁珠分選多發(fā)性骨髓瘤樣本
            2.3.2 對(duì)照組樣本單個(gè)核細(xì)胞提取
            2.3.3 TRIzol法細(xì)胞總RNA提取
            2.3.4 cDNA鏈合成及反轉(zhuǎn)錄
            2.3.5 Realtime反應(yīng)
            2.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 circ-CDYL在初診MM患者中表達(dá)上調(diào)
        3.2 MM中 circ-CDYL表達(dá)水平與臨床分期呈正相關(guān)
        3.3 circ-CDYL高表達(dá)可作為MM預(yù)后不良指標(biāo)
    4 討論
第二部分 :circ-CDYL通過miR-1180 調(diào)節(jié)YAP表達(dá)影響MM細(xì)胞生物學(xué)行為的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑及耗材
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 國(guó)際生物學(xué)信息途徑和計(jì)算機(jī)分析軟件包
        2.2 研究對(duì)象
            2.2.1 細(xì)胞株
        2.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.2 慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建
            2.3.3 cell-Light TM Ed U細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)
            2.3.4 細(xì)胞CCK-8增殖檢測(cè)
            2.3.5 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.3.6 circ-CDYL細(xì)胞內(nèi)定位
            2.3.7 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)circ-CDYL靶向miRNA并進(jìn)行qRT-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
            2.3.8 circ-CDYL下拉實(shí)驗(yàn)
            2.3.9 熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
            2.3.10 WB檢測(cè)
            2.3.11 Transwell實(shí)驗(yàn)
            2.3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 沉默circ-CDYL抑制MM細(xì)胞的增殖
        3.2 沉默circ-CDYL促進(jìn)MM細(xì)胞的凋亡
        3.3 circ-CDYL靶向結(jié)合mi R-1180
        3.4 miR-1180 靶向作用YAP基因
        3.5 circ-CDYL通過mi R-1180 上調(diào)YAP的表達(dá)
        3.6 YAP上調(diào)促進(jìn)MM細(xì)胞增殖與侵襲
    4 討論
第三部分 :circ-CDYL在體內(nèi)的功能研究
    1前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑及耗材
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑的配制
        2.2 研究對(duì)象和分組
        2.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
            2.3.2 構(gòu)建裸鼠移植瘤模型
            2.3.3 qRT-PCR檢測(cè)瘤體組織circ-CDYL/miR-1180/YAP的表達(dá)
            2.3.4 HE染色觀察瘤細(xì)胞形態(tài)
            2.3.5 免疫組化染色檢測(cè)瘤細(xì)胞中Ki-67和YAP表達(dá)
    3 結(jié)果
        3.1 circ-CDYL下調(diào)抑制裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)
        3.2 移植瘤組織中circ-CDYL/mi R-1180 呈負(fù)相關(guān),mi R-1180/YAP呈負(fù)相關(guān)
        3.3 沉默circ-CDYL降低體內(nèi)瘤細(xì)胞Ki-67 表達(dá),增加YAP表達(dá)
    4 討論
結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3184834