目的:肝癌是全球第二大常見的癌癥,肝細胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原發(fā)性肝癌的70%～90%是最主要的病理亞型。目前,肝癌的臨床治療手段主要有手術(shù)切除、化療、放療、經(jīng)導(dǎo)管肝動脈化療栓塞（transarterial chemoembolization,TACE）法、局部射頻熱消融（radiofrequency ablation,RFA）法、肝臟移植等治療方法。肝癌手術(shù)仍然是根除肝癌的首選方法,而且腫瘤越小,五年生存率越高。然而當患者出現(xiàn)明顯的肝癌癥狀就診時,病情往往已比較嚴重,多數(shù)處于中晚期。肝癌晚期的患者由于不具備良好的肝儲備功能,對介入化療等治療方法耐受力不足,常常使肝癌患者預(yù)后差,存活時間較短。因此,早期預(yù)后不良肝細胞癌患者的鑒定和中晚期肝細胞癌患者安全有效的治療手段是目前研究的兩大關(guān)鍵問題。肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)與機體的免疫系統(tǒng)密切相關(guān),肝臟組織中含有大量的淋巴細胞,其中NK細胞約占總肝淋巴細胞的30%,遠遠超出了NK細胞在外周血中的占比,提示NK細胞在肝細胞癌免疫治療中可能發(fā)揮著重要的作用。NK細胞殺傷腫瘤細胞的能力取決于細胞上抑... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:AGR2 表位肽上調(diào)肝癌MICA/B表達增加肝細胞癌對NK細胞的敏感性
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料與試劑
            2.1.1 細胞來源
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 密度梯度離心法
            2.2.3 NK細胞擴增培養(yǎng)
            2.2.4 磁珠Buffer的配置
            2.2.5 磁珠篩選NK細胞
            2.2.6 流式細胞分析術(shù)
            2.2.7 CD107a脫顆粒實驗
            2.2.8 酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)
            2.2.9 乳酸脫氫酶(LDH)釋放實驗
            2.2.10 蛋白免疫印跡實驗(Western Blot)
            2.2.11 實時熒光定量PCR(q RT-PCR)
            2.2.12 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 AGR2表位肽增強肝細胞癌對NK細胞殺傷作用的敏感性
        3.2 AGR2表位肽對NK細胞殺傷肝細胞癌活性無影響
        3.3 AGR2 表位肽上調(diào)肝細胞癌MICA/B的表達
    4 討論
第二部分 :AGR2 表位肽通過P38 通路參與CHOP/AP-1 調(diào)節(jié)MICA/B的表達
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 細胞來源
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 試劑配制
            2.2.2 Western blot及 q RT-PCR
            2.2.3 染色質(zhì)免疫共沉淀
            2.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 探索AGR2 表位肽調(diào)控肝細胞癌MICA/B表達量的機制
        3.2 AGR2 表位肽通過激活p38 MAPK通路上調(diào)MICA/B表達增強對NK細胞的敏感性
        3.3 CHOP/AP-1 組合參與MICA/B的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    4 討論
第三部分 :AGR2表位肽在體增強肝細胞癌對NK細胞的敏感性
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 試劑與儀器
            2.1.1 主要實驗試劑
            2.1.2 主要實驗儀器
        2.2 實驗材料
            2.2.1 細胞來源
            2.2.2 實驗動物
        2.3 實驗方法
            2.3.1 實驗動物分組
            2.3.2 移植瘤模型的建立
            2.3.3 移植瘤評估
            2.3.4 qRT-PCR
            2.3.5 Western Blot
            2.3.6 流式細胞術(shù)
            2.3.7 原代細胞提取
            2.3.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 成功建模NOD/SCID免疫缺陷肝癌細胞Bel-7402 荷瘤鼠
        3.2 AGR2表位肽增強了NK細胞對移植瘤的治療作用
        3.3 AGR2 表位肽上調(diào)在體肝癌細胞MICA/B的表達
    4 討論
結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介



本文編號：3174129