目的:肝癌是全球第二大常見(jiàn)的癌癥,肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原發(fā)性肝癌的70%～90%是最主要的病理亞型。目前,肝癌的臨床治療手段主要有手術(shù)切除、化療、放療、經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈化療栓塞（transarterial chemoembolization,TACE）法、局部射頻熱消融（radiofrequency ablation,RFA）法、肝臟移植等治療方法。肝癌手術(shù)仍然是根除肝癌的首選方法,而且腫瘤越小,五年生存率越高。然而當(dāng)患者出現(xiàn)明顯的肝癌癥狀就診時(shí),病情往往已比較嚴(yán)重,多數(shù)處于中晚期。肝癌晚期的患者由于不具備良好的肝儲(chǔ)備功能,對(duì)介入化療等治療方法耐受力不足,常常使肝癌患者預(yù)后差,存活時(shí)間較短。因此,早期預(yù)后不良肝細(xì)胞癌患者的鑒定和中晚期肝細(xì)胞癌患者安全有效的治療手段是目前研究的兩大關(guān)鍵問(wèn)題。肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)與機(jī)體的免疫系統(tǒng)密切相關(guān),肝臟組織中含有大量的淋巴細(xì)胞,其中NK細(xì)胞約占總肝淋巴細(xì)胞的30%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了NK細(xì)胞在外周血中的占比,提示NK細(xì)胞在肝細(xì)胞癌免疫治療中可能發(fā)揮著重要的作用。NK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的能力取決于細(xì)胞上抑... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分:AGR2 表位肽上調(diào)肝癌MICA/B表達(dá)增加肝細(xì)胞癌對(duì)NK細(xì)胞的敏感性
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
            2.1.1 細(xì)胞來(lái)源
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 密度梯度離心法
            2.2.3 NK細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)
            2.2.4 磁珠Buffer的配置
            2.2.5 磁珠篩選NK細(xì)胞
            2.2.6 流式細(xì)胞分析術(shù)
            2.2.7 CD107a脫顆粒實(shí)驗(yàn)
            2.2.8 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)
            2.2.9 乳酸脫氫酶(LDH)釋放實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)
            2.2.11 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)
            2.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 AGR2表位肽增強(qiáng)肝細(xì)胞癌對(duì)NK細(xì)胞殺傷作用的敏感性
        3.2 AGR2表位肽對(duì)NK細(xì)胞殺傷肝細(xì)胞癌活性無(wú)影響
        3.3 AGR2 表位肽上調(diào)肝細(xì)胞癌MICA/B的表達(dá)
    4 討論
第二部分 :AGR2 表位肽通過(guò)P38 通路參與CHOP/AP-1 調(diào)節(jié)MICA/B的表達(dá)
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 細(xì)胞來(lái)源
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 試劑配制
            2.2.2 Western blot及 q RT-PCR
            2.2.3 染色質(zhì)免疫共沉淀
            2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 探索AGR2 表位肽調(diào)控肝細(xì)胞癌MICA/B表達(dá)量的機(jī)制
        3.2 AGR2 表位肽通過(guò)激活p38 MAPK通路上調(diào)MICA/B表達(dá)增強(qiáng)對(duì)NK細(xì)胞的敏感性
        3.3 CHOP/AP-1 組合參與MICA/B的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    4 討論
第三部分 :AGR2表位肽在體增強(qiáng)肝細(xì)胞癌對(duì)NK細(xì)胞的敏感性
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 試劑與儀器
            2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)材料
            2.2.1 細(xì)胞來(lái)源
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
            2.3.2 移植瘤模型的建立
            2.3.3 移植瘤評(píng)估
            2.3.4 qRT-PCR
            2.3.5 Western Blot
            2.3.6 流式細(xì)胞術(shù)
            2.3.7 原代細(xì)胞提取
            2.3.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 成功建模NOD/SCID免疫缺陷肝癌細(xì)胞Bel-7402 荷瘤鼠
        3.2 AGR2表位肽增強(qiáng)了NK細(xì)胞對(duì)移植瘤的治療作用
        3.3 AGR2 表位肽上調(diào)在體肝癌細(xì)胞MICA/B的表達(dá)
    4 討論
結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3174129