原發(fā)性肝癌是全球常見的惡性腫瘤之一,肝癌患者5年總體生存率不超過17%,目前針對晚期肝癌的一線用藥仍以多重酪氨酸激酶受體抑制劑為主,其中一線抗肝癌藥物索拉非尼相對安慰劑來說,僅增加了肝癌患者2.7個月的生存期,且其容易產(chǎn)生耐藥性。目前認(rèn)為,晚期肝癌藥物開發(fā)策略主要為尋找靶向新通路的分子或?qū)ふ宜骼悄嵩雒舻姆肿印otch和Wnt通路是介導(dǎo)肝癌發(fā)生發(fā)展的重要通路,其中Wnt通路的重要轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白β-catenin在肝癌中的突變率達(dá)到20-40%。實(shí)驗(yàn)室前期通過RBP-Jκ熒光素酶報告基因系統(tǒng)篩選到一個Notch通路的抑制劑鴉膽子苦素D（BD）,其能明顯抑制Notch通路配體Jagged1的表達(dá),同時對肝癌細(xì)胞有明顯的抑制作用。在藥效評價上,本研究通過肝癌原位移植模型進(jìn)一步驗(yàn)證BD抗肝癌及與索拉非尼聯(lián)用的效果;機(jī)制上,本研究進(jìn)一步深入探究BD抗肝癌作用機(jī)制,以期為肝癌治療提供一定的科學(xué)依據(jù)及先導(dǎo)化合物。研究方法:1、本研究通過裸鼠原位肝癌模型驗(yàn)證BD對肝癌生長作用的影響及聯(lián)合索拉非尼的治療效果;通過H&E及免疫組化技術(shù)測定BD對裸鼠肝原位腫瘤細(xì)胞生長的影響;2、通過β-catenin和... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
    一、肝癌及臨床治療簡介
        （一）肝癌及其風(fēng)險因素
        （二）肝癌治療策略
        （三）肝癌臨床試驗(yàn)藥物總結(jié)
    二、Wnt信號通路與肝癌及其臨床試驗(yàn)藥物
        （一）Wnt信號通路簡介
        （二）Wnt通路與肝癌
        （三）Wnt通路臨床試驗(yàn)藥物總結(jié)
    三、鴉膽子苦素類化合物的抗腫瘤研究現(xiàn)狀
第一章 Bruceine D體內(nèi)抗腫瘤及協(xié)同索拉非尼抗肝癌研究
    一、引言
    二、實(shí)驗(yàn)材料
        （一）實(shí)驗(yàn)動物
        （二）實(shí)驗(yàn)用具
        （三）藥品和試劑
        （四）主要儀器
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        （一）溶液配制
        （二）裸鼠肝癌原位異體移植瘤模型建立
        （三）藥物處理和取材
        （四）細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、凍存
        （五）腫瘤組織H&E染色分析
        （六）腫瘤組織免疫組織化學(xué)分析—TUNEL和Ki67
    四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        （一）BD抑制肝癌細(xì)胞在裸鼠肝臟內(nèi)生長
        （二）BD增強(qiáng)索拉非尼體內(nèi)抗肝癌作用
    五、小結(jié)與討論
第二章 Bruceine D抗腫瘤機(jī)制研究
    一、引言
    二、實(shí)驗(yàn)材料
        （一）細(xì)胞株及菌株
        （二）藥品與試劑
        （三）實(shí)驗(yàn)儀器
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        （一）細(xì)胞培養(yǎng)
        （二）免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot）
        （三）RT-PCR
        （四）shJagged1和shβ-catenin干擾實(shí)驗(yàn)
        （五）Wnt通路激活劑及抑制劑處理對Jagged1蛋白表達(dá)影響 35
        （六）免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）
        （七）細(xì)胞核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)
        （八）免疫熒光共聚焦
        （九）Wnt3a重組蛋白及GSK3β 抑制劑處理對BD作用的影響37
        （十）蛋白酶抑制劑處理驗(yàn)證BD對 β-catenin降解途徑的影響 37
        （十一）CRM1抑制劑處理檢測BD對 β-catenin出核途徑的影響
    四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        （一）肝癌細(xì)胞上Wnt/β-catenin與Jagged1的調(diào)控關(guān)系及BD對Wnt通路轉(zhuǎn)錄水平的影響
        （二）BD對 β-catenin細(xì)胞核內(nèi)水平的影響
        （三）BD對 β-catenin總量影響及與GSK3β 上游通路的關(guān)系 .. 41
        （四）BD誘導(dǎo) β-catenin的蛋白酶體降解
        （五）BD對 β-catenin出核途徑CRM1的影響
        （六）BD對肝癌組織中 β-catenin和Jagged1的表達(dá)量的影響 . 44
    五、小結(jié)與討論
第三章 Bruceine D抗腫瘤靶標(biāo)驗(yàn)證
    一、引言
    二、實(shí)驗(yàn)材料
        （一）菌株
        （二）藥品與試劑
        （三）實(shí)驗(yàn)儀器
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        （一）蛋白表達(dá)與純化
        （二）Cellular Thermal Shift Assay（CETSA）
        （三）Protein Thermal Shift Assay
        （四）Biacore
        （五）MicroScale Thermophoresis（MST）
    四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        （一）CETSA
        （二）Thermal Shift Assay
        （三）Biacore
        （四）MST
    五、小結(jié)與討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Second line systemic therapies for hepatocellular carcinoma: Reasons for the failure[J]. Marcello Maida,Massimo Iavarone,Maurizio Raineri,Calogero Cammà,Giuseppe Cabibbo.  World Journal of Hepatology. 2015(17)
[2]Alcohol and hepatocellular carcinoma:A review and a point of view[J]. Gianni Testino,Silvia Leone,Paolo Borro.  World Journal of Gastroenterology. 2014(43)
[3]鴉膽子油乳抗腫瘤機(jī)制及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 趙楠,韓鳳娟,王桂媛,李玉花.  生物技術(shù)通訊. 2014(05)
[4]High-intensity focused ultrasound ablation:An effective bridging therapy for hepatocellular carcinoma patients[J]. Tan To Cheung,Sheung Tat Fan,See Ching Chan,Kenneth SH Chok,Ferdinand SK Chu,Caroline R Jenkins,Regina CL Lo,James YY Fung,Albert CY Chan,William W Sharr,Simon HY Tsang,Wing Chiu Dai,Ronnie TP Poon,Chung Mau Lo.  World Journal of Gastroenterology. 2013(20)



本文編號：3174062