目的:建立缺氧誘導(dǎo)的綠色熒光蛋白表達(dá)乳腺癌細(xì)胞模型,以作為HIF-1α活體成像報(bào)告系統(tǒng)。方法:選取5HRE/GFP質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染小鼠乳腺癌細(xì)胞Ca761,加藥物篩選,通過(guò)極限稀釋法獲取單克隆細(xì)胞株,加100μM CoCl2模擬缺氧條件處理24h,熒光顯微鏡下選取熒光最強(qiáng)的細(xì)胞株,擴(kuò)大培養(yǎng)并凍存。缺氧預(yù)處理后,熒光顯微鏡觀察傳代細(xì)胞的綠色熒光,同時(shí)用Western Blot方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)HIF-1 α的表達(dá),以驗(yàn)證細(xì)胞內(nèi)綠色熒光蛋白和HIF-1 α的表達(dá)。將2×106個(gè)細(xì)胞（0.1ml）接種于615系小鼠皮下,觀察細(xì)胞成瘤情況,并使用熒光成像平臺(tái)觀察移植瘤的熒光信號(hào)。結(jié)果:經(jīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及藥物篩選后的細(xì)胞命名為Ca761-gre-gfp,該細(xì)胞經(jīng)模擬缺氧預(yù)處理后能夠在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光,且Western Blot能夠檢測(cè)到HIF-1α蛋白的表達(dá),而無(wú)模擬缺氧預(yù)處理的細(xì)胞則無(wú)上述熒光信號(hào)及蛋白表達(dá)。Ca761-gre-gfp接種615系小鼠皮下后,可見腫瘤生長(zhǎng),并且腫瘤內(nèi)可觀察到熒光信號(hào)。結(jié)論:成功建立了缺氧誘導(dǎo)的綠色熒光蛋白表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞模型,可以作為HIF-1 α活體成像報(bào)告系統(tǒng),適... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 缺氧誘導(dǎo)的綠色熒光蛋白表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞模型的建立
    摘要
    Abstract
    實(shí)驗(yàn)材料
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 乳腺癌血管生成及HIF-1α活性的多模態(tài)成像研究
    摘要
    Abstract
    實(shí)驗(yàn)材料
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
綜述 缺氧誘導(dǎo)因子1-α與乳腺癌的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
縮略詞中英對(duì)照表
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3156708