發(fā)布時(shí)間：2021-04-21 01:43

　　研究背景與目的惡性腫瘤不同于正常組織最重要的代謝特點(diǎn)是能量耗損遠(yuǎn)超過所能獲得的能量供應(yīng),腫瘤細(xì)胞及其周圍具有促腫瘤功能的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）常處于饑餓狀態(tài)。然而,腫瘤細(xì)胞和TAMs會(huì)通過調(diào)節(jié)特定的代謝機(jī)制感知并適應(yīng)各種極端環(huán)境從而得以存活。通過選擇性地控制TAMs或者腫瘤細(xì)胞中的某些代謝途徑,可以阻斷相應(yīng)的惡性表型。半乳糖凝集素-3（Galectin-3,Gal-3）是一種β-半乳糖苷結(jié)合蛋白,廣泛分布于各種腫瘤細(xì)胞和TAMs中并參與腫瘤發(fā)展的多個(gè)過程。本研究將通過分析Gal-3在各種極端環(huán)境下對(duì)TAMs和乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞代謝途徑的影響,探究干擾Gal-3的表達(dá)是否可以改變TAMs和乳腺癌細(xì)胞的代謝行為,削弱兩者適應(yīng)極端環(huán)境的能力,進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,旨在為開發(fā)通過靶向Gal-3來調(diào)控TAMs和腫瘤細(xì)胞的代謝途徑進(jìn)而抑制腫瘤發(fā)展的化合物或干預(yù)手段提供新思路。實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果實(shí)驗(yàn)方法:1.THP-1細(xì)胞向TAMs和M2型巨噬細(xì)胞的分化及鑒定采用MDA-MB-231細(xì)胞條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)人外周血單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞分化為TAMs,或者采用細(xì)胞因子刺激THP-... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：124 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
前言
    1. 缺氧缺營(yíng)養(yǎng)的腫瘤微環(huán)境——誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞和TAMs進(jìn)行代謝重編程
        1.1 腫瘤細(xì)胞及其相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）的代謝重編程
        1.2 缺氧缺營(yíng)養(yǎng)環(huán)境可以激發(fā)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞發(fā)揮促腫瘤功能
    2. Gal-3可能參與腫瘤細(xì)胞和TAMs在腫瘤微環(huán)境中的代謝重編程
        2.1 Gal-3的結(jié)構(gòu)和功能
        2.2 Gal-3在代謝性疾病和腫瘤代謝方面的研究進(jìn)展
        2.3 腫瘤細(xì)胞和TAMs可能通過高表達(dá)和分泌Gal-3來啟動(dòng)代謝應(yīng)激反應(yīng)
    3. 本課題的主要研究方向
實(shí)驗(yàn)部分
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 誘導(dǎo)劑或抑制劑
        1.2 細(xì)胞株
        1.3 試劑
            1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)試劑
            1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
            1.3.3 電泳和Western blot檢測(cè)試劑
            1.3.4 免疫熒光檢測(cè)試劑
            1.3.5 代謝相關(guān)檢測(cè)試劑盒
            1.3.6 PCR檢測(cè)試劑
            1.3.7 其他試劑
        1.4 試劑配制
        1.5 儀器設(shè)備
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 體外實(shí)驗(yàn)
            2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
            2.1.2 巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)
            2.1.3 流式細(xì)胞術(shù)鑒定巨噬細(xì)胞的M2表型
            2.1.4 RT-PCR法鑒定巨噬細(xì)胞的M2表型
            2.1.5 siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
            2.1.6 不同培養(yǎng)條件細(xì)胞橫型的建立
            2.1.7 代謝指標(biāo)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
            2.1.8 Western blot實(shí)驗(yàn)
            2.1.9 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 THP-1細(xì)胞向TAMs和M2型巨噬細(xì)胞的分化及鑒定
            3.1.1 誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分化為TAMs
            3.1.2 誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分化為M2型巨噬細(xì)胞
            3.1.3 TAMs和M2型巨噬細(xì)胞的M2表型鑒定
        3.2 TAMs、M2型巨噬細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞不同培養(yǎng)模型的建立
            3.2.1 TAMs、M2型巨噬細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞在不同培養(yǎng)條件下的形態(tài)學(xué)變化
            3.2.2 缺氧或缺氧缺營(yíng)養(yǎng)的TAMs、M2型巨噬細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞中HIF-1α的表達(dá)及活性升高
        3.3 不同培養(yǎng)條件下干擾Gal-3對(duì)TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞生存率和糖酵解水平的影響
            3.3.1 缺氧缺營(yíng)養(yǎng)條件下干擾Gal-3可降低TAMs細(xì)胞、M2型巨噬細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞的生存率
            3.3.2 不同培養(yǎng)條件（除缺糖培養(yǎng)）下干擾Gal-3可抑制TAMs和M2型巨噬細(xì)胞的糖酵解途徑
            3.3.3 不同培養(yǎng)條件（除缺糖培養(yǎng)）下干擾Gal-3可抑制MDA-MB-231細(xì)胞的糖酵解途徑
            3.3.4 在缺氧或缺氧缺營(yíng)養(yǎng)條件下Gal-3可促進(jìn)TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞中PKM2的表達(dá)
        3.4 不同培養(yǎng)環(huán)境對(duì)TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)代謝相關(guān)蛋白相互調(diào)控關(guān)系的影響
            3.4.1 不同培養(yǎng)環(huán)境對(duì)TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)代謝調(diào)控蛋白表達(dá)的影響
            3.4.2 缺氧缺糖條件下AMPK通過抑制NF-κB的活性來負(fù)向調(diào)控Gal-3
            3.4.3 缺氧缺營(yíng)養(yǎng)條件下AMPK可抑制PI3K和Gal-3的表達(dá)
            3.4.4 PI3K在缺氧缺營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)條件下可以促進(jìn)Gal-3的表達(dá)并抑制AMPK活化
        3.5 Gal-3在TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞糖酵解與脂肪酸氧化途徑轉(zhuǎn)換關(guān)系中的作用
            3.5.1 正�；蛉毖鯒l件下干擾TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞中的Gal-3可明顯激活A(yù)MPK并降低NEFA水平
            3.5.2 干擾TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞中的Gal-3后,細(xì)胞通過激活A(yù)MPK和CPT1-A來促進(jìn)糖酵解向FAO的轉(zhuǎn)化以維持細(xì)胞生存
        3.6 缺氧低糖環(huán)境下TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞通過激活細(xì)胞內(nèi)的PI3K/NF-κB/Gal-3/GLUT1通路來加強(qiáng)對(duì)葡萄糖的攝取利用
            3.6.1 Gal-3在環(huán)境葡萄糖濃度為5.6 mM的缺氧條件下可最大程度地促進(jìn)TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞攝取葡萄糖并維持細(xì)胞的生存率
            3.6.2 TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)代謝調(diào)控蛋白在不同缺氧缺糖濃度下的表達(dá)量和活性變化
            3.6.3 在環(huán)境葡萄糖濃度低于5.6 mM的缺氧條件下TAMs中的AMPK可負(fù)調(diào)控Gal-3的表達(dá)
            3.6.4 在葡萄糖濃度為5.6 mM的缺氧低糖條件下PI3K和NF-κB是Gal-3和GLUT1的上游正向調(diào)控因子
            3.6.5 在缺氧低糖條件下TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞可通過激活PI3K/NF-κB/Gal-3/GLUT1通路來加速攝取葡萄糖
            3.6.6 TAMs和MDA-MB-231細(xì)胞中代謝相關(guān)蛋白的表達(dá)水平隨缺氧缺糖培養(yǎng)時(shí)間的變化
            3.6.7 PI3K和NF-κB在缺氧低糖條件下可時(shí)間依賴性地促進(jìn)Gal-3和GLUT1的表達(dá)
        3.7 干擾或未干擾Gal-3的TAMs條件培養(yǎng)基對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖及糖酵解水平的影響
            3.7.1 干擾或未干擾Gal-3的TAMs條件培養(yǎng)基對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖的影響
            3.7.2 干擾或未干擾Gal-3的TAMs條件培養(yǎng)基對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞糖酵解水平的影響
    4. 討論
        4.1 在缺氧腫瘤微環(huán)境中,Gal-3的高表達(dá)可抑制MDA-MB-231細(xì)胞和TAMs內(nèi)糖酵解向脂肪酸氧化途徑的轉(zhuǎn)化
        4.2 在缺氧缺糖的腫瘤微環(huán)境中,細(xì)胞內(nèi)活化的AMPK可阻斷Gal-3對(duì)糖酵解的促進(jìn)作用并激活FAO途徑
        4.3 在缺氧缺血清的腫瘤微環(huán)境中,Gal-3通過激活GLUT1、PKM2和LDH來促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞和TAMs內(nèi)的糖酵解代謝
        4.4 PI3K和AMPK在乳腺癌及其相關(guān)巨噬細(xì)胞中的相互調(diào)控關(guān)系與細(xì)胞所處微環(huán)境的成分變化密切相關(guān)
        4.5 在葡萄糖濃度為5.6 mM的缺氧低糖條件下,MDA-MB-231細(xì)胞和TAMs可通過激活PI3K/NF-κB/Gal-3/GLUT1通路來加速攝取葡萄糖
        4.6 TAMs產(chǎn)生或分泌的Gal-3在缺氧缺營(yíng)養(yǎng)條件下可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和糖酵解代謝
    5. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3150805