前列腺癌是男性中常見的惡性腫瘤。隨著我國(guó)人口老齡化的加重,生活方式的改變,前列腺癌患者日益增多,迫切需要及時(shí)有效的診斷和治療。前列腺特異性抗原（Prostate Specific Antigen,PSA）是前列腺癌的腫瘤標(biāo)志物,廣泛應(yīng)用于患者的診斷分析。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展,人們逐漸發(fā)現(xiàn)PSA含量的細(xì)微變化與早期發(fā)現(xiàn)前列腺癌,監(jiān)測(cè)治療效果和預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)等存在密切關(guān)系,故對(duì)PSA的超靈敏和高時(shí)效檢測(cè)具有重要意義。表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)（Surface-Enhanced Raman Spectroscopy,SERS）是一種利用貴金屬增強(qiáng)拉曼信號(hào)的技術(shù),當(dāng)靶標(biāo)分子分布于納米級(jí)金屬結(jié)構(gòu)表面時(shí),其拉曼信號(hào)會(huì)得到大幅的增強(qiáng),故解決了傳統(tǒng)拉曼散射信號(hào)弱的問題。SERS過程所需樣品量小且不受水的干擾,根據(jù)所得的拉曼光譜能夠獲得靶標(biāo)的結(jié)構(gòu)狀態(tài)、物質(zhì)含量等豐富信息,這促使SERS廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)和生物物理等領(lǐng)域。本文中,我們利用SERS技術(shù)對(duì)PSA進(jìn)行了均相免疫傳感超靈敏檢測(cè),以滿足逐漸提高的檢測(cè)要求,且整個(gè)檢測(cè)過程無需進(jìn)行清洗。首先,設(shè)計(jì)一對(duì)能夠識(shí)別PSA的SERS探針,這兩個(gè)探針上均修飾了抗體,分別結(jié)合P... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 前列腺特異性抗原（Prostate Specific Antigen,PSA）的傳感研究
        1.1.1 前列腺特異性抗原
        1.1.2 前列腺特異性抗原檢測(cè)方法和研究進(jìn)展
    1.2 表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)（Surface-Enhanced Raman Spectroscopy,SERS）的應(yīng)用
        1.2.1 拉曼散射原理
        1.2.2 表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)
        1.2.3 表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)增強(qiáng)機(jī)理
        1.2.4 SERS檢測(cè)PSA領(lǐng)域的研究進(jìn)展
        1.2.5 SERS在生物分析方面的應(yīng)用
    1.3 Domain Z的性質(zhì)和應(yīng)用
        1.3.1 金黃色葡萄球菌Protein A（Staphylococcus aureus Protein A,SPA）
        1.3.2 SPA的應(yīng)用
        1.3.3 Domain Z的應(yīng)用
    1.4 存在的問題
    1.5 本論文的研究思路和內(nèi)容
第二章 應(yīng)用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)均相檢測(cè)PSA
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 合成銀納米粒子
        2.3.2 銀納米顆粒和磁納米粒子表面修飾抗體
        2.3.3 SERS檢測(cè)樣品
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 均相免疫傳感檢測(cè)PSA原理
        2.4.2 傳感機(jī)制的表征
        2.4.3 SERS檢測(cè)不同濃度PSA的結(jié)果
        2.4.4 SERS檢測(cè)的選擇性
    2.5 本章小結(jié)
第三章 Domain Z表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)和純化
    3.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.2 樣品和試劑
        3.2.3 試劑的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 目的基因的設(shè)計(jì)合成及PCR擴(kuò)增
        3.3.2 PCR產(chǎn)物的純化與鑒定
        3.3.3 酶切與連接
        3.3.4 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化和篩選
        3.3.5 轉(zhuǎn)化大腸桿菌及蛋白表達(dá)
        3.3.6 純化融合蛋白
        3.3.7 融合蛋白標(biāo)簽切除及目的蛋白純化
        3.3.8 Domain Z蛋白的鑒定
        3.3.9 Domain Z蛋白濃度的測(cè)定
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 目的基因合成與擴(kuò)增結(jié)果
        3.3.2 酶切和連接的結(jié)果
        3.3.3 重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果
        3.3.4 Domain Z不同純化階段的電泳結(jié)果
        3.3.5 Domain Z 蛋白的濃度
    3.4 本章小結(jié)
第四章 Domain Z的性質(zhì)以及增強(qiáng)效果
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.2 樣品和試劑
        4.2.3 試劑的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 Domain Z活性的鑒定
        4.3.2 在磁性納米顆粒表面偶聯(lián)Domain Z
        4.3.3 制備SERS探針MNs@Domain Z@Ab2/4-ABP并進(jìn)行SERS檢測(cè)
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 IgG Fc封閉效果及有效封閉濃度的確定
        4.4.2 Domain Z對(duì)不同抗體親和力的確定
        4.4.3 BCA蛋白定量結(jié)果及Domain Z的偶聯(lián)率
        4.4.4 應(yīng)用SERS探針MNs@Domain Z@Ab2/4-ABP檢測(cè)PSA的結(jié)果
    4.5 本章小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血清前列腺特異性抗原的BA－ELISA測(cè)定法的建立及臨床應(yīng)用[J]. 韓文科,顧方六.  中華泌尿外科雜志. 1996(11)

博士論文
[1]抗體親和層析配體的分子動(dòng)力學(xué)設(shè)計(jì)及純化抗體能力的研究[D]. 戴璐.吉林大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3150293