目的:近年來(lái)地西他濱（decitabine,DAC）在急性髓系白血�。╝cute myeloid leukemia,AML）的治療中取得了較大進(jìn)展,但部分患者在應(yīng)用DAC治療過(guò)程中由于原發(fā)耐藥或者繼發(fā)耐藥而導(dǎo)致治療失敗和疾病進(jìn)展。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)DNA結(jié)合抑制因子1（inhibitor of DNA binding 1,ID1）可能參與DAC耐藥,本研究擬采用過(guò)表達(dá)和沉默ID1表達(dá)的方法,分析ID1對(duì)白血病細(xì)胞生物學(xué)功能的影響,探討其在DAC耐藥中的作用機(jī)制。方法:（1）采用基因過(guò)表達(dá)技術(shù)將ID1通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染白血病細(xì)胞株K562和HL60,獲得穩(wěn)定過(guò)表達(dá)ID1的K562和HL60細(xì)胞（ID1-K562、ID1-HL60）及其對(duì)照組細(xì)胞（NCK562、NC-HL60）;采用基因沉默技術(shù)將shID1基因通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染DAC耐藥K562細(xì)胞株（K562/DAC）,經(jīng)篩選獲得ID1沉默的K562/DAC細(xì)胞（shID1-K562/DAC）及其對(duì)照組細(xì)胞（shNC-K562/DAC）;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法（real-time quantitative PCR,RQPCR）和蛋白免疫印跡法... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 急性髓系白血病
    1.2 地西他濱在A(yíng)ML治療中的應(yīng)用及其耐藥情況
    1.3 DNA結(jié)合抑制因子1
    1.4 miR-29b-ID1 異常可能參與DAC耐藥
第二章 研究的目的、方法與技術(shù)、方案設(shè)計(jì)及意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究的方法與技術(shù)
        2.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RQ-PCR）
        2.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)
        2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
        2.2.4細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 裸鼠皮下移植瘤建立
        2.2.6 蛋白免疫印跡技術(shù)（Western blot）
    2.3 研究方案設(shè)計(jì)
        2.3.1 ID1 過(guò)表達(dá)對(duì)白血病細(xì)胞生物學(xué)功能的影響
        2.3.2 沉默ID1對(duì)DAC耐藥白血病細(xì)胞生物學(xué)功能影響
        2.3.3 miR-29b-ID1 信號(hào)對(duì)K562/DAC的生物學(xué)功能影響
    2.4 研究意義
第三章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞
        3.1.2 Balb/c裸鼠
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 引物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 骨髓有核細(xì)胞的分離
        3.2.2 總RNA提取
        3.2.3 RNA逆轉(zhuǎn)錄
        3.2.4 RQ-PCR檢測(cè)ID1和miR-29b基因的表達(dá)
        3.2.5 亞硫酸氫鹽測(cè)序法（BSP）
        3.2.6 PCR產(chǎn)物的純化與回收
        3.2.7 構(gòu)建重組載體
        3.2.8 重組質(zhì)粒提取、鑒定及測(cè)序
        3.2.9 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.10 慢病毒轉(zhuǎn)染
        3.2.11 臺(tái)盼藍(lán)拒染法
        3.2.12 細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)
        3.2.13 半抑制濃度（IC50）檢測(cè)（計(jì)數(shù)法）
        3.2.14 Annexin V-PE/7-AAD方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        3.2.15 蛋白免疫印跡（Western blot）法檢測(cè)蛋白表達(dá)水平
        3.2.16 裸鼠皮下移植瘤模型建立
        3.2.17 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 ID1 過(guò)表達(dá)對(duì)白血病細(xì)胞生物學(xué)功能的影響
        4.1.1 構(gòu)建ID1 過(guò)表達(dá)的K562和HL60 細(xì)胞株
        4.1.2 RQ-PCR和 Western blot法鑒定ID1 在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá)水平
        4.1.3 ID1 過(guò)表達(dá)對(duì)K562和HL60 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        4.1.4 ID1對(duì)K562和HL60 細(xì)胞凋亡的影響
        4.1.5 ID1 過(guò)表達(dá)對(duì)K562和HL60 細(xì)胞DAC耐藥性的影響
        4.1.6 ID1 過(guò)表達(dá)在小鼠體內(nèi)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng),增加白血病細(xì)胞對(duì)DAC的耐藥性
    4.2 沉默ID1對(duì)DAC耐藥白血病細(xì)胞的生物學(xué)影響
        4.2.1 RQ-PCR檢測(cè)DAC耐藥白血病細(xì)胞株中ID1 表達(dá)水平
        4.2.2 沉默ID1在K652/DAC細(xì)胞株中的表達(dá)
        4.2.3 沉默ID1對(duì)K562/DAC生長(zhǎng)的影響
        4.2.4 沉默ID1對(duì)K562/DAC耐藥性的影響
    4.3 miR-29b-ID1 信號(hào)對(duì)K562/DAC生物學(xué)功能的影響
        4.3.1 ID1在K562和K562/DAC細(xì)胞株中的表達(dá)和甲基化水平
        4.3.2 構(gòu)建miR-29b過(guò)表達(dá)的DAC耐藥K562 細(xì)胞株
        4.3.3 miR-29b過(guò)表達(dá)對(duì)K562/DAC細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        4.3.4 miR-29b可通過(guò)降低ID1 的表達(dá)增加K562/DAC細(xì)胞對(duì)DAC敏感性
第五章 討論
參考文獻(xiàn)
第六章 結(jié)論及展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其他科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]地西他濱治療血液系統(tǒng)疾病的研究進(jìn)展[J]. 彭嵐,邵宗鴻.  國(guó)際輸血及血液學(xué)雜志. 2019 (01)

博士論文
[1]去甲基化藥物治療較高危骨髓增生異常綜合征的療效預(yù)測(cè)及耐藥相關(guān)機(jī)制的研究[D]. 吳萍.南方醫(yī)科大學(xué) 2016

碩士論文
[1]地西他濱對(duì)K562細(xì)胞、K562/ADR細(xì)胞及原發(fā)耐藥的AML原代細(xì)胞中多藥耐藥基因MDR1和P170耐藥蛋白的影響[D]. 魏陽(yáng)璇.河北醫(yī)科大學(xué) 2018
[2]MiR-29b/c在A(yíng)ML中的表達(dá)及參與地西他濱耐藥研究[D]. 楊東琴.江蘇大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3150248