目的:近年來地西他濱（decitabine,DAC）在急性髓系白血�。╝cute myeloid leukemia,AML）的治療中取得了較大進展,但部分患者在應用DAC治療過程中由于原發(fā)耐藥或者繼發(fā)耐藥而導致治療失敗和疾病進展。我們的前期研究發(fā)現DNA結合抑制因子1（inhibitor of DNA binding 1,ID1）可能參與DAC耐藥,本研究擬采用過表達和沉默ID1表達的方法,分析ID1對白血病細胞生物學功能的影響,探討其在DAC耐藥中的作用機制。方法:（1）采用基因過表達技術將ID1通過慢病毒轉染白血病細胞株K562和HL60,獲得穩(wěn)定過表達ID1的K562和HL60細胞（ID1-K562、ID1-HL60）及其對照組細胞（NCK562、NC-HL60）;采用基因沉默技術將shID1基因通過慢病毒轉染DAC耐藥K562細胞株（K562/DAC）,經篩選獲得ID1沉默的K562/DAC細胞（shID1-K562/DAC）及其對照組細胞（shNC-K562/DAC）;采用實時熒光定量PCR法（real-time quantitative PCR,RQPCR）和蛋白免疫印跡法... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 急性髓系白血病
    1.2 地西他濱在AML治療中的應用及其耐藥情況
    1.3 DNA結合抑制因子1
    1.4 miR-29b-ID1 異�？赡軈⑴cDAC耐藥
第二章 研究的目的、方法與技術、方案設計及意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究的方法與技術
        2.2.1 實時熒光定量PCR（RQ-PCR）
        2.2.2 慢病毒轉染技術
        2.2.3 細胞培養(yǎng)技術
        2.2.4細胞功能學實驗
        2.2.5 裸鼠皮下移植瘤建立
        2.2.6 蛋白免疫印跡技術（Western blot）
    2.3 研究方案設計
        2.3.1 ID1 過表達對白血病細胞生物學功能的影響
        2.3.2 沉默ID1對DAC耐藥白血病細胞生物學功能影響
        2.3.3 miR-29b-ID1 信號對K562/DAC的生物學功能影響
    2.4 研究意義
第三章 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞
        3.1.2 Balb/c裸鼠
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 引物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 骨髓有核細胞的分離
        3.2.2 總RNA提取
        3.2.3 RNA逆轉錄
        3.2.4 RQ-PCR檢測ID1和miR-29b基因的表達
        3.2.5 亞硫酸氫鹽測序法（BSP）
        3.2.6 PCR產物的純化與回收
        3.2.7 構建重組載體
        3.2.8 重組質粒提取、鑒定及測序
        3.2.9 細胞培養(yǎng)
        3.2.10 慢病毒轉染
        3.2.11 臺盼藍拒染法
        3.2.12 細胞計數法檢測細胞生長
        3.2.13 半抑制濃度（IC50）檢測（計數法）
        3.2.14 Annexin V-PE/7-AAD方法檢測細胞凋亡
        3.2.15 蛋白免疫印跡（Western blot）法檢測蛋白表達水平
        3.2.16 裸鼠皮下移植瘤模型建立
        3.2.17 統(tǒng)計學分析
第四章 實驗結果
    4.1 ID1 過表達對白血病細胞生物學功能的影響
        4.1.1 構建ID1 過表達的K562和HL60 細胞株
        4.1.2 RQ-PCR和 Western blot法鑒定ID1 在轉染細胞中的表達水平
        4.1.3 ID1 過表達對K562和HL60 細胞生長的影響
        4.1.4 ID1對K562和HL60 細胞凋亡的影響
        4.1.5 ID1 過表達對K562和HL60 細胞DAC耐藥性的影響
        4.1.6 ID1 過表達在小鼠體內促進腫瘤生長,增加白血病細胞對DAC的耐藥性
    4.2 沉默ID1對DAC耐藥白血病細胞的生物學影響
        4.2.1 RQ-PCR檢測DAC耐藥白血病細胞株中ID1 表達水平
        4.2.2 沉默ID1在K652/DAC細胞株中的表達
        4.2.3 沉默ID1對K562/DAC生長的影響
        4.2.4 沉默ID1對K562/DAC耐藥性的影響
    4.3 miR-29b-ID1 信號對K562/DAC生物學功能的影響
        4.3.1 ID1在K562和K562/DAC細胞株中的表達和甲基化水平
        4.3.2 構建miR-29b過表達的DAC耐藥K562 細胞株
        4.3.3 miR-29b過表達對K562/DAC細胞生長的影響
        4.3.4 miR-29b可通過降低ID1 的表達增加K562/DAC細胞對DAC敏感性
第五章 討論
參考文獻
第六章 結論及展望
    主要結論
    展望
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文及其他科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]地西他濱治療血液系統(tǒng)疾病的研究進展[J]. 彭嵐,邵宗鴻.  國際輸血及血液學雜志. 2019 (01)

博士論文
[1]去甲基化藥物治療較高危骨髓增生異常綜合征的療效預測及耐藥相關機制的研究[D]. 吳萍.南方醫(yī)科大學 2016

碩士論文
[1]地西他濱對K562細胞、K562/ADR細胞及原發(fā)耐藥的AML原代細胞中多藥耐藥基因MDR1和P170耐藥蛋白的影響[D]. 魏陽璇.河北醫(yī)科大學 2018
[2]MiR-29b/c在AML中的表達及參與地西他濱耐藥研究[D]. 楊東琴.江蘇大學 2017



本文編號：3150248