【目的】現(xiàn)在研究結(jié)果表明,表觀遺傳學(xué)在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程當(dāng)中起到重要作用。伴有MLL重排的急性髓系白血�。∕LL髓系白血�。┮�11q23染色體異位形成MLL融合蛋白為特征,是發(fā)展迅速、預(yù)后極差的一種惡性髓系白血病。隨著相關(guān)機制研究的深入,組蛋白甲基化H3K79的異常與MLL白血病的相關(guān)性得到確認,進而開發(fā)了DOT1L抑制劑等靶向治療藥物。由于體內(nèi)藥物代謝或動力學(xué)等原因,截止目前尚無DOT1L抑制劑正式進入臨床應(yīng)用。新的實驗研究發(fā)現(xiàn),MLL髓系白血病患者基因組有異常的DNA甲基化存在,提示DNA甲基化可能是MLL治療的另一個靶點。甲基化Cp G結(jié)合蛋白2（MBD2）是特定的DNA甲基化閱讀器,通過破壞MBD2的辨認和讀取能力可影響DNA甲基化在基因表達的調(diào)控,且不像傳統(tǒng)的DNMTs抑制劑誘發(fā)全基因組的低甲基化,因此成為與DNA甲基化相關(guān)的潛在治療靶點。本文探討MBD2在MLL髓系白血病發(fā)病中的作用及其機制研究,并探究MBD2作為MLL髓系白血病治療靶標的可行性�！痉椒ā坷肕BD2全身敲除小鼠與同背景的C57小鼠交配,獲得雜合小鼠,進而得到同批次的MBD2全身敲除小鼠及相應(yīng)的野生型小鼠。構(gòu)... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

MBD2敲除小鼠雜交繁殖流程

圖 1.1 MBD2 敲除小鼠雜交繁殖流程為了鑒定新生小鼠的基因型，我們根據(jù) WT 和 MBD2-/-基因序列分別收集每只小鼠的少量尾巴或腳趾等組織，裂解并提取 DNA 進行 PCR，產(chǎn)物得到相應(yīng)的條帶[38，39]。接著，我們收集來自 WT 和 MBD2-/-小鼠（已平的鑒定）的脾臟（SP）、胸腺（Thymus）、骨髓（BM），分別進一步在基水平鑒定，確認 MBD2-/-小鼠的造血系統(tǒng)中 MBD2 是完全敲除[38，39]（

出現(xiàn)瀕死狀態(tài)時，留取標本，結(jié)合流式檢測的結(jié)果，確定在成功構(gòu)建 MLL-AF9 急性髓系白血病的小鼠模型，并因為白血病進展導(dǎo)致小鼠的死亡（圖 2.1）。圖2.1 流式細胞術(shù)分別檢測MBD2敲除組及WT組小鼠發(fā)病后骨髓細胞的免疫表型3、MBD2 敲降對 MLL-AF9 白血病發(fā)生發(fā)展的影響為了研究 MBD2 對 MLL-AF9 白血病發(fā)生發(fā)展的影響，我們利用 MBD2-/-小鼠和MLL-AF9 白血病的小鼠模型，將包裝有 MSCV-MLL/AF9-IRES-GFP 的逆轉(zhuǎn)錄病毒分別轉(zhuǎn)染 MBD2 純合敲除和對應(yīng)的野生型小鼠的 c-Kit+細胞，觀察兩組小鼠的一般狀態(tài)及生存期發(fā)現(xiàn) MBD2 敲除組小鼠整體生存期更長。當(dāng)小鼠出現(xiàn)白血病相關(guān)表現(xiàn)，且處于瀕死狀態(tài)時，斷頸處死小鼠，分別收集兩組小鼠的骨髓細胞并分選原代白血病細胞。體外分化克隆轉(zhuǎn)化實驗結(jié)果如圖所示（圖 3.1），根據(jù) MLL-AF9 白血病細胞體外克隆形態(tài)的致密度不同，將克隆分為 A、B、C 三類

【參考文獻】：
博士論文
[1]MBD2在正常造血和T細胞分化以及急性T淋巴細胞白血病中的作用[D]. 周密.華中科技大學(xué) 2015



本文編號：3144302