目的:明確轉(zhuǎn)錄因子Pokemon對三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）干細(xì)胞干性特征的促進(jìn)作用,初步探討Pokemon促進(jìn)TNBC干細(xì)胞干性特征的作用機(jī)制,為TNBC尤其是難治性TNBC的治療提供潛在靶點(diǎn)。方法:以體外培養(yǎng)的人TNBC細(xì)胞系MDA-MB-231和HS-578T為實(shí)驗(yàn)對象,通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測沉默Pokemon后TNBC細(xì)胞的侵襲能力變化情況;通過微球體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)檢測沉默Pokemon后MDA-MB-231和HS-578T細(xì)胞形成微球體的數(shù)目及體積的變化情況;通過Aldeflour測定法檢測在MDA-MB-231和HS-578T細(xì)胞中沉默Pokemon后乙醛脫氫酶ALDH+干/祖細(xì)胞亞群比例變化情況。為探索Pokemon調(diào)控TNBC干細(xì)胞干性特征的初步作用機(jī)制,通過全基因組表達(dá)譜芯片篩選出在MDA-MB-231細(xì)胞中沉默Pokemon后變化最大的干性因子,并通過TCGA數(shù)據(jù)庫分析其與Pokemon的相關(guān)性,再進(jìn)一步通過qRT-PCR及Western blot技術(shù)驗(yàn)證Pokemon下調(diào)后該干性因子的變化情況;此外,通過... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

沉默Pokemon可以抑制TNBC細(xì)胞的侵襲能力

344.2沉默Pokemon可顯著抑制TNBC干細(xì)胞的干性4.2.1通過微球體形成實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證沉默Pokemon對TNBC干細(xì)胞干性的影響情況為了探索轉(zhuǎn)錄因子Pokemon對三陰性乳腺癌干細(xì)胞的干性影響，我們通過微球體形成實(shí)驗(yàn)來鑒定在TNBC細(xì)胞系MDA-MB-231和HS-578T中沉默Pokemon后其干細(xì)胞成球能力，以驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子Pokemon對TNBC細(xì)胞干性的影響情況。我們發(fā)現(xiàn)在TNBC細(xì)胞系MDA-MB-231和HS-578T中沉默Pokemon后，與對照組相比，其微球體形成的數(shù)目減少，同時(shí)形成的微球體的體積也明顯變小，并且三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)計(jì)算成球數(shù)目所得數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明沉默Pokemon可顯著抑制TNBC干細(xì)胞的干性（圖4.2）。圖4.2沉默Pokemon對TNBC干細(xì)胞干性具有抑制作用。（A）根據(jù)微球體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，在MDA-MB-231和HS-578T細(xì)胞中，沉默Pokemon顯著減少了TNBC細(xì)胞系MDA-MB-231和HS-578T形成的微球體的數(shù)目和體積。（B）結(jié)果顯示為具有平均值±sd的柱狀圖，n=3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)顯著性由Student"st-test確定。**P<0.01.放大倍數(shù)40X,比例尺代表100μm。

354.2.2通過Aldeflour測定法來驗(yàn)證沉默Pokemon對TNBC細(xì)胞干性的影響情況我們通過Aldeflour測定法檢測沉默Pokemon后對TNBC群中干細(xì)胞群比例的變化情況，探討轉(zhuǎn)錄因子Pokemon對對三陰性乳腺癌干細(xì)胞干性的影響情況。我們發(fā)現(xiàn)，在TNBC細(xì)胞系MDA-MB-231和HS-578T中，沉默Pokemon后，與對照組相比，ALDH+細(xì)胞群的比例明顯降低，并且三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明沉默Pokemon可顯著抑制TNBC干細(xì)胞的干性（圖4.3）。圖4.3沉默Pokemon對TNBC干細(xì)胞具有抑制作用。（A）在MDA-MB-231和HS-578T細(xì)胞中，根據(jù)ALDH測定法，檢測沉默Pokemon降低了TNBC細(xì)胞系MDA-MB-231和HS-578T中ALDH+細(xì)胞群的比例。（B）結(jié)果顯示為具有平均值±sd的柱狀圖，n=3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)顯著性由Student"st-test確定。*P<0.05。4.3全基因組芯片篩選沉默Pokemon后變化倍數(shù)最大的干性指標(biāo)為了進(jìn)一步明確沉默Pokemon后對TNBC干細(xì)胞干性影響的關(guān)鍵靶點(diǎn)，我們通過全基因組表達(dá)譜芯片分析發(fā)現(xiàn)，Pokemon下調(diào)后可以影響一系列包括CD24，CD44，ALDH1A1，KLF4，KLF5，SOX2，SOX8，SOX9，NANOG，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]泛素-蛋白酶體系統(tǒng)與精子DNA損傷修復(fù)的研究進(jìn)展[J]. 張國巍,蔡鴻財(cái),商學(xué)軍.  中華男科學(xué)雜志. 2016(09)



本文編號：3137066