[目的]順鉑是晚期舌鱗癌常用的化療藥物,但耐藥性是影響舌鱗癌患者預(yù)后的主要因素,然而,舌鱗癌順鉑耐藥的潛在機制尚未完全闡明。本課題擬研究LAMP2在舌鱗癌細胞順鉑耐藥中的作用及機制,為臨床舌鱗癌治療提供新的策略。[方法]通過小劑量順鉑反復(fù)誘導(dǎo)建立舌鱗癌順鉑耐藥株;Western blot檢測順鉑處理舌鱗癌細胞后自噬相關(guān)蛋白的表達水平;MTT實驗檢測氯喹作用耐藥細胞株后的增殖活性改變;siRNA方法敲低舌鱗癌細胞LAMP2的表達,MTT實驗以及AnnexinV-FITC/PI流式細胞術(shù)檢測敲低LAMP2后舌鱗癌細胞增殖及凋亡情況。[結(jié)果]成功構(gòu)建人舌鱗癌順鉑耐藥細胞株SCC25/DDP;順鉑作用SCC25/DDP后隨著作用時間的延長LAMP2的表達逐漸升高,然而親代SCC25細胞LAMP2的表達逐漸降低;氯喹逆轉(zhuǎn)舌鱗癌順鉑耐藥;敲低LAMP2后增加舌鱗癌細胞對順鉑的敏感性。[結(jié)論]順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌耐藥細胞株LAMP2表達升高,自噬誘導(dǎo)舌鱗癌細胞株順鉑耐藥,敲低LAMP2表達增強舌鱗癌細胞株順鉑敏感性,抑制增殖,促進凋亡。本研究擬為解決臨床舌鱗癌順鉑耐藥問題提供了新思路、新方向。 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１舌鱗癌順怕耐藥株的構(gòu)建：ＳＣＣ－２５／ＤＤＰ

?ｖ?｜｜?｜?丨＂??ｌｃ３ｉｉｉ?Ｊ?ＩｏｌｌｊｌｊＯｒｉ?ＩＩＩ！?ＩＩＩ！??ｇａｐｄｈ??Ｃ?Ｄ??８ｎｇ／ｍｌ?ＤＤＰ?ＳＣＣ－２５／ＤＤＰ?ＳＣＣ－２５／ＤＤＰ??＾?Ａ?＊＜＞?Ｉ?３＂ｌ?■?□?ＬＡＭＰ２??孑菸夕?＜ｆ?Ｉ?Ｈｐ６２??ＬＡＭＰ２?￣?二?｜?Ｓ?２－?｜?■?ＬＣ３－Ｍ????ｃ??ｐ６２［＾ｒ??＿ｊ?！?｜?｜?■■??二：一?．ｉｏｌｌｌｌｌ?Ｉｉｍ?ｌｌｌｌ??ＧＡＰＤＨ?丨?????圖２順鉆誘導(dǎo)舌鱗癌耐藥細胞株ＬＡＭＰ２表達升高。（Ａ）?ＳＣＣ－２５予ＤＤＰ?（８ｎｇ／ｍｌ）處理??Ｏｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ，提取各組細胞蛋白，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測ＬＡＭＰ２、ＬＣ３ＩＩ、ｐ６２表達水平變??化。（Ｂ）圖Ａ的灰度分析相對值柱狀圖。（Ｃ）?ＳＣＣ－２５／ＤＤＰ予ＤＤＰ?（８ｐｇ／ｍｌ）處理Ｏｈ、??６ｈ、１２ｈ、２４ｈ，提取各組細胞蛋白，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測ＬＡＭＰ２、ＬＣ３ＩＩ、ｐ６２表達水平變化。??（Ｄ）圖Ｃ的灰度分析相對值柱狀圖。??３、自噬誘導(dǎo)舌鱗癌細胞順鉬耐藥??氯喹阻斷自噬體與溶酶體的融合，并堿化溶酶體，使得自噬體形成減少并不??能降解。為了進一步探索溶酶體在舌鱗癌順鉑耐藥中的作用。通過ＭＴＴ實驗檢??測ＳＣＣ－２５／ＤＤＰ細胞的增殖活力發(fā)現(xiàn)，氯喹可明顯提高ＳＣＣ－２５／ＤＤＰ細胞對順鉑??的敏感性。提示氯喹通過減少自噬體的形成逆轉(zhuǎn)舌鱗癌順鉑耐藥，因而自噬誘導(dǎo)??舌鱗癌細胞順怕耐藥。??２６??

ＳＣＣ－２５／ＤＤＰ??〇?？?Ｃｏｎｔｒｏｌ??Ｉ１．０－?？?．?■?■?ＤＤＰ??５?入－－—???Ａ?＊?Ａ?ＤＤＰ＾ＣＱ??Ｌ．?＇ｙ??３?＾??ｏ．ｏ－Ｌ－ｉ?１?１?１???１?１—??公?Ｎ?＇?、?Ｖ?ｂ?備??Ｄａｙ??圖３氯喹提高舌鱗癌耐藥細胞株對順鉆的敏感性。ＭＴＴ實驗檢測順鉑或順拍＋氯喹作用??ＳＣＣ－２５／ＤＤＰ細胞后０－６天的增殖活力。??４、ｓｉＲＮＡ技術(shù)敲低ＬＡＭＰ２表達??基于ＬＡＭＰ２在溶酶體生物合成中發(fā)揮重要作用，溶酶體可影響順鉑對舌鱗??癌細胞的細胞毒性，我們想知道敲低ＬＡＭＰ２是否可以增敏順鈾。利用ｓｉＲＮＡ技??術(shù)敲低舌鱗癌細胞內(nèi)ＬＡＭＰ２表達，并通過Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測敲??低效率，發(fā)現(xiàn)ｓｉＲＮＡ＃３敲低效果最顯著。??＾?ｔｌ??＜１＞?１．０－??ＬＡＭＰ２Ｉ?■???Ｉ?°?Ｓ＇?｜?￣￣｜?�。�??ｇａｐｄｈ?Ｉ?＿????｜?ｏ．ｏ－Ｌ＾＾Ｈ＿＿＿＿＿，＿＿＿＿，￣￣￣，???Ｓ?？?Ｓ＇?Ｓ＊??ｃ?／?／?／??ｆ１５ｌ??Ｓ??ｚ?１０＇??＼〇Ｍ＾??ｙ?ｙ?ｙ??圖４?ｓｉＲＮＡ方法敲低ＬＡＭＰ２表達（Ａ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測敲低ＬＡＭＰ２的蛋白表達。??（Ｂ）圖Ａ的灰度分析相對值柱狀圖。（Ｃ）Ｒｅａｌｔｉｍｅ－ＰＣＲ檢測敲低ＬＡＭＰ２的ｍＲＮＡ??表達??２７??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Role of autophagy in tumorigenesis,metastasis,targeted therapy and drug resistance of hepatocellular carcinoma[J]. Fang Huang,Bing-Rong Wang,Yi-Gang Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2018(41)
[2]順鉑耐藥機制研究進展[J]. 吳小雪,姚群峰.  湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2017(05)



本文編號：3129969