目的:乳腺癌是導(dǎo)致女性癌癥患者死亡的第二大主要原因,它的發(fā)生和進(jìn)展與多種信號通路和轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)。有報(bào)道指出抑癌基因的甲基化和microRNA（miRNA）的異常表達(dá)參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展,其中DNMT1作為甲基轉(zhuǎn)移酶在包括乳腺癌在內(nèi)的數(shù)種腫瘤中表達(dá)水平升高,miR-142-5p作為miRNA成員在多種腫瘤中表達(dá)失常。DNMT1在乳腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了什么作用?miR-142-5p與DNMT1是如何相互作用,影響乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移的?本研究將從與乳腺癌遷移和增殖相關(guān)的信號通路和轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行探討,闡明乳腺癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制,為尋找新的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)提供新方向。本文圍繞MKL-1/miR-142/DNMT1/maspin信號通路調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的遷移和增殖展開研究。方法:用分子生物學(xué)方法構(gòu)建MKL-1的表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-MKL-1,以及熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒pGL-3-miR-142-5p-WT-LUC、pGL-3-miR-142-5p-MUT-LUC、pmirGLO-DNMT1-WT-3′UTR-LUC和pmirGLO-DNMT1-MUT-3′UTR-LUC。在乳腺癌細(xì)胞中敲... 

【文章來源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系、菌種、動(dòng)物
        2.1.2 引物
    2.2 試劑
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建及提取相關(guān)試劑
        2.2.2 Western Blot相關(guān)試劑
        2.2.3 RNA提取及實(shí)時(shí)熒光定量PCR相關(guān)試劑
        2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑
        2.2.5 轉(zhuǎn)染相關(guān)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.2 質(zhì)粒提取與轉(zhuǎn)染
        2.4.3 轉(zhuǎn)染方法
        2.4.4 熒光素酶報(bào)告分析
        2.4.5 Western Bloting
        2.4.6 劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.4.7 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（Transwell）
        2.4.8 RNA提取及反轉(zhuǎn)錄、實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.4.9 免疫熒光
        2.4.10 EdU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.4.11 CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.4.12 慢病毒包裝轉(zhuǎn)染
        2.4.13 動(dòng)物成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.4.14 免疫組化（IHC）
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 DNMT1抑制maspin表達(dá),調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞增殖遷移能力
    3.2 MKL-1影響DNMT1和maspin的表達(dá)
    3.3 MiR-142-5p抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和增殖并調(diào)節(jié)細(xì)胞周期
    3.4 MiR-142-5p靶向3’UTR抑制DNMT1 表達(dá),并上調(diào)maspin
    3.5 MKL-1能夠促進(jìn)miR-142-5p轉(zhuǎn)錄
    3.6 MiR-142-5p抑制體內(nèi)乳腺癌細(xì)胞的腫瘤生長
第4章 討論與展望
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目



本文編號：3115816