發(fā)布時(shí)間：2021-04-02 17:34

　　目的:分離純化人原代胃癌細(xì)胞,探究皖南蝮蛇毒抑瘤組分-I（Agkis-trodon halys venom anti-tumor component-I,AHVAC-Ⅰ）對(duì)人原代胃癌細(xì)胞增殖的作用并深入研究其相關(guān)作用機(jī)制。方法:胰酶消化法和差速貼壁法分離和純化出的原代胃癌細(xì)胞為體外研究對(duì)象,以不同濃度的AHVAC-Ⅰ處理人原代胃癌細(xì)胞24h后,采用細(xì)胞增殖和毒性檢測(cè)法（Cell Counting Kit-8,CCK-8法）檢測(cè)人胃癌原代細(xì)胞的增殖抑制率,得出AHVAC-Ⅰ的對(duì)人胃癌原代細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。根據(jù)IC₅₀結(jié)果設(shè)置4組AHVAC-Ⅰ（0、4、8、16μg/ml）實(shí)驗(yàn)濃度組,用不同濃度的AHVAC-Ⅰ分別處理人胃癌原代細(xì)胞24h后,采用蘇木素-伊紅染色法（Hematoxylin-Eosin staining,HE）、流式細(xì)胞術(shù)及免疫組化法（Immunohistochemistry,IHC）檢測(cè)AHVAC-Ⅰ誘導(dǎo)人胃癌原代細(xì)胞發(fā)生凋亡的效應(yīng);運(yùn)用ELISA法評(píng)估AHVAC-Ⅰ作用細(xì)胞后氧化應(yīng)激水平,蛋白印跡法檢測(cè)Bax、Cy... 

【文章來(lái)源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人胃癌原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)（×200）

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文14圖2.人胃癌原代細(xì)胞的免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定CEA和AE1/AE3蛋白表達(dá)（×200）A.AE1/AE3蛋白在細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)B.CEA蛋白在細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)BA

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文29與2μg/mlAHVAC-Ⅰ相比較**P＜0.01圖3.AHVAC-Ⅰ對(duì)人原代胃癌細(xì)胞的增殖抑制率（%）2HE染色法觀察AHVAC-Ⅰ對(duì)人原代胃癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化如下圖所示，不同濃度的AHVAC-Ⅰ（4、8、16μg/ml）處理人原代胃癌細(xì)胞24h。HE染色鏡下觀察，正常對(duì)照組細(xì)胞貼壁緊密，細(xì)胞間隙窄，核分裂像較多，細(xì)胞呈不規(guī)則多邊形和梭形。與正常對(duì)照組相比較，隨AHVAC-Ⅰ濃度的增加，細(xì)胞間隙逐漸增寬，細(xì)胞貼壁不牢，易脫落，核固縮明顯，細(xì)胞逐漸回縮變圓，可見(jiàn)凋亡細(xì)胞。A.正常對(duì)照組B.4μg/mlC.8μg/mlD.16μg/mlE.陽(yáng)性對(duì)照組圖4.HE染色法觀察AHVAC-Ⅰ對(duì)人原代胃癌細(xì)胞形態(tài)變化（×200）********ABCDE

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]MTT法檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤原代細(xì)胞對(duì)不同濃度多柔比星的體外藥物敏感性研究[D]. 覃超.桂林醫(yī)學(xué)院 2017
[2]廣西眼鏡蛇毒L-氨基酸氧化酶體外抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 李麗蘭.廣西醫(yī)科大學(xué) 2007



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