目的:利用噬菌體展示技術體外篩選方法獲得人乳腺髓樣癌Bcap-37細胞特異性結合的小分子多肽,并進行初步鑒定,為乳腺癌的早期診斷及治療提供理論基礎。方法:我們體外培養(yǎng)人乳腺髓樣癌Bcap-37細胞作為靶細胞,人正常乳腺上皮細胞MCF-10A為吸附細胞,利用噬菌體展示技術,將噬菌體展示隨機七肽庫與人乳腺髓樣癌Bcap-37細胞進行減性體外篩選,從而獲得可與人乳腺癌細胞特異性結合的含有外源性多肽的單克隆噬菌體。通過四輪體外減性篩選后,隨機挑選20個生長良好的單克隆噬菌體,進行擴增純化。運用ELISA法鑒定噬菌體對人乳腺癌Bcap-37細胞的親和力。提取親和力較高的單克隆噬菌體DNA,進行序列測定,并推導出與乳腺癌結合的外源性多肽的氨基酸序列,再進行同源性分析。采用固相合成法合成多肽及其相應的對照肽。MTT法檢測合成肽及對照肽對人乳腺癌Bcap-37細胞的增殖情況的影響。通過細胞損傷修復實驗,研究靶向肽對人乳腺癌Bcap-37細胞遷移能力的影響。結果:1.體外成功培養(yǎng)生長良好的人乳腺髓樣癌Bcap-37細胞及人正常乳腺上皮MCF-10A細胞。2.通過四輪體外篩選后,噬菌體在人乳腺髓樣癌Bca... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

人乳腺癌Bcap-37細胞（×200）

山西醫(yī)科大學碩士學位論文2 結 果2.1 細胞的體外培養(yǎng)人乳腺髓樣癌 Bcap-37 細胞及人正常乳腺上皮細胞 MCF-10A 體外培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察細胞：人乳腺髓樣癌 Bcap-37 細胞呈單層貼壁生長，細胞膜完整，胞漿飽滿，細胞的形態(tài)呈梭形或不規(guī)則形；人正常乳腺上皮 MCF-10A 細胞亦呈單層貼壁生長，細胞膜完整，胞漿飽滿，細胞形態(tài)多呈不規(guī)則多邊形（見圖 2-1,2-2）

圖 2-3：第一輪篩選后滴度測定結果 圖 2-4：第四輪篩選后滴度測定結果表 2-1 四輪減性篩選后陽性噬菌體克隆的富集結果Round of screening Input phage(pfu) Output phage(pfu) Yield1 2×10114.0×1042.0×10-72 2×10111.8×1069.0×10-6342×10112×10111.4×1073.2×1077.0×10-51.6×10-42.3 ELISA 法鑒定陽性噬菌體克隆與乳腺癌細胞的親和力經過 4 輪體外減性篩選后，鋪制 LB/IPTG/X-gal 平板（同噬菌體滴度測定），20個生長良好的單克隆噬菌體藍斑被隨機挑取，利用 ELISA 法鑒定單克隆噬菌體對人乳腺癌 Bcap-37 細胞的親和力，測出每孔 OD450nm值。結果顯示：1、3、5、6、8、12、


本文編號：3094295