發(fā)布時(shí)間：2021-03-22 18:42

　　目的:利用噬菌體展示技術(shù)體外篩選方法獲得人乳腺髓樣癌Bcap-37細(xì)胞特異性結(jié)合的小分子多肽,并進(jìn)行初步鑒定,為乳腺癌的早期診斷及治療提供理論基礎(chǔ)。方法:我們體外培養(yǎng)人乳腺髓樣癌Bcap-37細(xì)胞作為靶細(xì)胞,人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A為吸附細(xì)胞,利用噬菌體展示技術(shù),將噬菌體展示隨機(jī)七肽庫與人乳腺髓樣癌Bcap-37細(xì)胞進(jìn)行減性體外篩選,從而獲得可與人乳腺癌細(xì)胞特異性結(jié)合的含有外源性多肽的單克隆噬菌體。通過四輪體外減性篩選后,隨機(jī)挑選20個(gè)生長(zhǎng)良好的單克隆噬菌體,進(jìn)行擴(kuò)增純化。運(yùn)用ELISA法鑒定噬菌體對(duì)人乳腺癌Bcap-37細(xì)胞的親和力。提取親和力較高的單克隆噬菌體DNA,進(jìn)行序列測(cè)定,并推導(dǎo)出與乳腺癌結(jié)合的外源性多肽的氨基酸序列,再進(jìn)行同源性分析。采用固相合成法合成多肽及其相應(yīng)的對(duì)照肽。MTT法檢測(cè)合成肽及對(duì)照肽對(duì)人乳腺癌Bcap-37細(xì)胞的增殖情況的影響。通過細(xì)胞損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn),研究靶向肽對(duì)人乳腺癌Bcap-37細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果:1.體外成功培養(yǎng)生長(zhǎng)良好的人乳腺髓樣癌Bcap-37細(xì)胞及人正常乳腺上皮MCF-10A細(xì)胞。2.通過四輪體外篩選后,噬菌體在人乳腺髓樣癌Bca... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人乳腺癌Bcap-37細(xì)胞（×200）

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2 結(jié) 果2.1 細(xì)胞的體外培養(yǎng)人乳腺髓樣癌 Bcap-37 細(xì)胞及人正常乳腺上皮細(xì)胞 MCF-10A 體外培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞：人乳腺髓樣癌 Bcap-37 細(xì)胞呈單層貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞膜完整，胞漿飽滿，細(xì)胞的形態(tài)呈梭形或不規(guī)則形；人正常乳腺上皮 MCF-10A 細(xì)胞亦呈單層貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞膜完整，胞漿飽滿，細(xì)胞形態(tài)多呈不規(guī)則多邊形（見圖 2-1,2-2）

圖 2-3：第一輪篩選后滴度測(cè)定結(jié)果 圖 2-4：第四輪篩選后滴度測(cè)定結(jié)果表 2-1 四輪減性篩選后陽性噬菌體克隆的富集結(jié)果Round of screening Input phage(pfu) Output phage(pfu) Yield1 2×10114.0×1042.0×10-72 2×10111.8×1069.0×10-6342×10112×10111.4×1073.2×1077.0×10-51.6×10-42.3 ELISA 法鑒定陽性噬菌體克隆與乳腺癌細(xì)胞的親和力經(jīng)過 4 輪體外減性篩選后，鋪制 LB/IPTG/X-gal 平板（同噬菌體滴度測(cè)定），20個(gè)生長(zhǎng)良好的單克隆噬菌體藍(lán)斑被隨機(jī)挑取，利用 ELISA 法鑒定單克隆噬菌體對(duì)人乳腺癌 Bcap-37 細(xì)胞的親和力，測(cè)出每孔 OD450nm值。結(jié)果顯示：1、3、5、6、8、12、


本文編號(hào)：3094295