目的:在本研究中我們選用攜帶L858R/T790M雙突變的人肺腺癌細(xì)胞株NCI-H1975、攜帶EGFRDEL19的人肺腺癌細(xì)胞PC-9、以及攜帶EGFR野生型的人腺癌細(xì)胞A549,為了研究BPI-15086對EGFR T790M突變的作用機(jī)制,觀察BPI-15086對各組細(xì)胞的影響。方法:利用ARMS實(shí)時PCR法對H1975、PC-9及A549細(xì)胞株進(jìn)行EGFR基因突變類型鑒定;CCK8法對各細(xì)胞株的增殖抑制率進(jìn)行檢測;流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度BPI-15086對H-1975、PC9、A549細(xì)胞作用24小時后細(xì)胞周期及凋亡的變化;流式細(xì)胞術(shù)分別檢測空白組、特定濃度BPI-15086對H-1975,PC9,A549細(xì)胞作用24小時后其細(xì)胞周期變化;Western-blot法檢測在不同濃度BPI-15086作用下,各細(xì)胞株的EMT相關(guān)E-cad表達(dá)水平的變化。結(jié)果:1、CCK8結(jié)果顯示BPI-15086能夠?qū)549、PC9、H1975細(xì)胞增殖產(chǎn)生相應(yīng)的抑制作用,隨著濃度的增加,抑制作用更加明顯,呈濃度依賴性（P<0.01）,其對H1975細(xì)胞增殖的抑制作用的效果是顯著的（P<... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１Ａ５４９、ＰＣ９、Ｈ１９７５三種細(xì)胞ＥＧＦＲ突變基因檢測結(jié)果??２１??

?表２?Ａ５４９、ＰＣ９、Ｈ１９７５細(xì)胞Ｅ－ｃａｄ在ＢＰ１－１５０８６作用下細(xì)胞周期分布的情況???ＢＰＩ１５０８６??Ａ５４９???ＰＣ９???Ｈ１９７５???（ｕｍｏｌ／１）?Ｇｌ／ＧＯ?Ｓ?Ｇ２／Ｍ?Ｇｌ／ＧＱ?Ｓ?Ｇ２／Ｍ?Ｇｌ／ＧＯ?Ｓ?Ｇ２／Ｍ??０?３６．９土２．４１?３１．９７土１．１０?３１．０７±２．３３?４５．３３土?１．７３?３９．４７±１．８３?１５．２０士?１．０４?５６．４５士１．６８?２１．６３士１．１５?２２．２士１．２４??５?４１．７士?１．１３?１３．７２±１．０４?４４．５４±２．０８?４９．７９±１．９１?１５．６０±１．９５?３５．９８±２．６２?６９．２３士２．４３?１４．２１?士０．９４?１６．６１?土０．９３??Ｐ?值?０．０３６?＜０．０１?＜０．０１?０．０４?＜０．０１?＜０．０１?＜０．０１?＜０．０１?＜０．０５??２３??

流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示ＢＰＩ１５０８６作用于Ａ５４９、ＰＣ９、Ｈ１９７５細(xì)胞２４ｈ后，??Ｇ０／Ｇ１期細(xì)胞比例均明顯升高（Ｐ＜０．０５），?Ｓ期細(xì)胞比例明顯減少（ＰＣ０．０５），提示提??示ＢＰＩ－１５０８６誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生顯著的Ｇ０／Ｇ１期周期阻滯（表２、圖３）。??ＢＰｌ－１５０８６?５ｕｍｏｌ／ｌ作用于三種細(xì)胞２４小時以后，Ｇ１／Ｇ０期細(xì)胞占比升高（Ｐ??值＜０．０５），而且Ｓ期細(xì)胞比例降低（Ｐ＜０．０１）。各組細(xì)胞Ｇ１／Ｇ０期細(xì)胞不同程度??升高，且Ｈ１９７５細(xì)胞Ｇ１／Ｇ０阻滯較Ａ５４９、ＰＣ９細(xì)胞明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義??（Ｐ＜０．０５）。以上結(jié)果說明ＢＰＩ－１５０８６可誘導(dǎo)ＮＳＣＬＣ細(xì)胞發(fā)生Ｇ１／Ｇ０阻滯，Ｓ期??減少。??４．流式細(xì)胞術(shù)檢測ＢＰＩ－１５０８６對三種細(xì)胞的細(xì)胞凋亡的影響??ＢＰＩ－１５０８６作用于Ａ５４９、ＰＣ９、Ｈ１９７５細(xì)胞２４ｈ后，電子顯微鏡下觀察各組細(xì)??胞形態(tài)變化，如圖４所示：細(xì)胞體積縮小，連接消失，與周圍的細(xì)胞脫離，細(xì)胞??質(zhì)密度增加，核質(zhì)濃縮，部分胞膜有小泡狀形成。??流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示ＢＰＩ１５０８６作用于各組細(xì)胞２４小時后

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3093682