目的:研究表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）聯(lián)合谷氨酰胺酶抑制劑CB-839對(duì)伊馬替尼耐藥K562細(xì)胞（K562/G細(xì)胞）增殖及凋亡的影響,為耐藥慢性粒細(xì)胞白血病患者的的治療提供新思路。方法:以K562/G細(xì)胞為研究對(duì)象。1.CCK8法檢測(cè)不同濃度CB-839及EGCG單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)K562/G細(xì)胞增殖活性的影響,計(jì)算不同藥物組的細(xì)胞增殖抑制率,并應(yīng)用Chou-Talalay聯(lián)合指數(shù)法研究CB-839與EGCG聯(lián)合應(yīng)用的效果,采用CalcuSyn軟件計(jì)算兩藥合用指數(shù)（Combination Index,CI）,分析兩藥聯(lián)合是否具有協(xié)同藥效。選擇協(xié)同作用最大的組合進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.采用流式法檢測(cè)對(duì)照組、CB-839組、EGCG組及聯(lián)合藥物組細(xì)胞周期分布情況和細(xì)胞凋亡率變化。4.Western blot法檢測(cè)對(duì)照組、CB-839組、EGCG組及聯(lián)合藥物組細(xì)胞Bcl-2、Bax及LC3B蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.CCK8結(jié)果顯示:不同濃度CB-839及EGCG均可一定程度上抑制K562/G細(xì)胞增殖（P<0.05）。CB-839組（1.25、2.5、5μmol/L）分別聯(lián)合EGCG組（... 

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不同濃度的CB-839對(duì)K562/G細(xì)胞增殖抑制率的影響

11圖2不同濃度的EGCG對(duì)K562/G細(xì)胞增殖抑制率的影響用不同濃度的CB-839組（1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L）分別與EGCG組（40μmol/L、80μmol/L、120μmol/L）聯(lián)合作用K562/G細(xì)胞48小時(shí)，CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，結(jié)果如表1所示：聯(lián)合組細(xì)胞增殖抑制率較對(duì)照組及單藥組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。用CompuSyn軟件分析結(jié)果顯示所有藥物聯(lián)合組CI值均＜1，說(shuō)明兩藥具有協(xié)同效應(yīng)，其中，當(dāng)CB839濃度為5μmol/L及EGCG濃度為80μmol/L時(shí)，CI值最小，協(xié)同作用最大，我們選擇該藥物組合進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。表1CB-839及EGCG單用或聯(lián)用對(duì)K562/G細(xì)胞的抑制作用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，%）藥物濃度(μmol/L)抑制率（%）CB-839EGCG0001.25018.22±1.21*2.5023.71±0.99*5034.79±0.94*04013.89±1.62*08025.03±1.98*012043.73±2.10*

13圖3CB-839聯(lián)合EGCG抑制K562/G細(xì)胞增殖的協(xié)同效應(yīng)曲線3.2CB-839與EGCG單用或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)K562/G細(xì)胞周期分布的影響細(xì)胞周期是是指一次細(xì)胞分裂結(jié)束開(kāi)始到下一次分裂結(jié)束的過(guò)程，是機(jī)體細(xì)胞從母代向子代進(jìn)行生命延續(xù)的連續(xù)過(guò)程，細(xì)胞周期紊亂將影響細(xì)胞正常生長(zhǎng)繁殖。碘化丙啶（PropidiumIodide，PI）是一種可以與雙鏈DNA結(jié)合產(chǎn)生熒光的染料，故我們可以通過(guò)碘化丙啶染色（PIstaining）法用流式分析儀檢測(cè)細(xì)胞DNA含量，并根據(jù)DNA含量的分布情況進(jìn)行細(xì)胞周期分析。結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，EGCG組及聯(lián)合藥物組細(xì)胞G2期比例升高，G1期細(xì)胞比例降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；而CB-839組與對(duì)照組相比，各細(xì)胞周期均無(wú)顯著性差異，P＞0.05。聯(lián)合藥物組與CB-839及EGCG單藥組相比G2期細(xì)胞比例升高，G1期細(xì)胞比例降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3090123