目的構(gòu)建抗人腫瘤內(nèi)皮標志物1（TEM1）全抗體IgG78的真核表達載體,進行表達純化后鑒定其生物學活性。方法利用PCR分別從單鏈抗體ScFv78中擴增TEM1抗體的輕、重鏈可變區(qū)基因,并克隆入帶有小鼠抗體恒定區(qū)的真核表達載體Bichim-L,瞬時轉(zhuǎn)染HEK293F細胞,表達產(chǎn)物用蛋白G親和層析柱進行純化,所得蛋白用SDS-PAGE和Western blot法進行鑒定,采用流式細胞術(shù)和活細胞ELISA檢測該抗體與TEM1陽性細胞的結(jié)合特異性及親和力。結(jié)果成功構(gòu)建了TEM1全抗體IgG78的真核表達載體,并在HEK293F細胞中表達。SDS-PAGE和Western blot法證實目的蛋白符合預期大小,流式細胞術(shù)及細胞ELISA結(jié)果顯示該抗體可特異性結(jié)合TEM1陽性腫瘤細胞,且有較高的親和力。結(jié)論成功獲得了一株具有良好結(jié)合特異性和較高親和力的TEM1抗體。 

【文章來源】：細胞與分子免疫學雜志. 2020,36(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

TEM1抗體真核表達載體的構(gòu)建和鑒定

TEM1抗體的SDS-PAGE和Western blot法鑒定

流式細胞術(shù)檢測TEM1抗體的結(jié)合活性


本文編號：3081196