發(fā)布時(shí)間：2021-03-14 00:44

　　目的構(gòu)建抗人腫瘤內(nèi)皮標(biāo)志物1（TEM1）全抗體IgG78的真核表達(dá)載體,進(jìn)行表達(dá)純化后鑒定其生物學(xué)活性。方法利用PCR分別從單鏈抗體ScFv78中擴(kuò)增TEM1抗體的輕、重鏈可變區(qū)基因,并克隆入帶有小鼠抗體恒定區(qū)的真核表達(dá)載體Bichim-L,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293F細(xì)胞,表達(dá)產(chǎn)物用蛋白G親和層析柱進(jìn)行純化,所得蛋白用SDS-PAGE和Western blot法進(jìn)行鑒定,采用流式細(xì)胞術(shù)和活細(xì)胞ELISA檢測(cè)該抗體與TEM1陽性細(xì)胞的結(jié)合特異性及親和力。結(jié)果成功構(gòu)建了TEM1全抗體IgG78的真核表達(dá)載體,并在HEK293F細(xì)胞中表達(dá)。SDS-PAGE和Western blot法證實(shí)目的蛋白符合預(yù)期大小,流式細(xì)胞術(shù)及細(xì)胞ELISA結(jié)果顯示該抗體可特異性結(jié)合TEM1陽性腫瘤細(xì)胞,且有較高的親和力。結(jié)論成功獲得了一株具有良好結(jié)合特異性和較高親和力的TEM1抗體。 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2020,36(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

TEM1抗體真核表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定

TEM1抗體的SDS-PAGE和Western blot法鑒定

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TEM1抗體的結(jié)合活性


本文編號(hào)：3081196