目的:探索DNA雙加氧酶TET1催化結(jié)構(gòu)域（TET1-CD）在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮的去甲基化作用,探討其在細(xì)胞和動物水平上對肝細(xì)胞癌的治療作用。方法:1.RT-qPCR和Western Blot分別檢測LO2細(xì)胞和SMMC 7721細(xì)胞中TET1mRNA以及蛋白表達(dá)水平;2.以LO2細(xì)胞c DNA為模板,根據(jù)TET1基因序列（GenBank:NM₀30625）設(shè)計(jì)上下游引物,獲得TET1-CD目的片段,克隆至真核細(xì)胞表達(dá)載體pflag-CMV4中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pflag-TET1-CD（p-TET1-CD）。采用點(diǎn)突變技術(shù),將TET1蛋白的的1672位組氨酸突變?yōu)槔野彼?1674位的天冬氨酸突變?yōu)楸彼幔℉1672Y,D1674A）,以pflag-TET1-CD重組質(zhì)粒為模板,設(shè)計(jì)上下游突變引物,獲得突變重組表達(dá)質(zhì)粒pflag-TET1-mCD（p-TET1-mCD）;3.Control,p-TET1-CD和p-TET1-mCD質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染SMMC 7721細(xì)胞,亞硫酸氫鹽測序法（BSP）檢測三組細(xì)胞中抑癌基因TET1,P16,SOCS1,APC和RASSF1A以及... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文對照詞表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑和材料
        2.1.1 細(xì)胞株及質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要設(shè)備和儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 RT-qPCR
        2.2.3 WesternBlot
        2.2.4 重組表達(dá)質(zhì)粒pflag-TET1-CD構(gòu)建
        2.2.5 重組突變表達(dá)質(zhì)粒pflag-TET1-mCD構(gòu)建
        2.2.6 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)
        2.2.7 亞硫酸氫鹽測序法（BSP）
        2.2.8 CellCountingKit（CCK8）
        2.2.9 kFluor594Click-ItEDU成像檢測
        2.2.10 細(xì)胞劃痕
        2.2.11 細(xì)胞遷移和侵襲
        2.2.12 動物實(shí)驗(yàn)
        2.2.13 數(shù)據(jù)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 SMMC7721細(xì)胞中TET1表達(dá)水平下降
    3.2 重組表達(dá)載體P-TET1-CD和P-TET1-MCD的測序鑒定
    3.3 TET1-CD去甲基化TSGS啟動子
    3.4 TET1-CD上調(diào)TSGSMRNA水平
    3.5 TET1-CD抑制SMMC7721細(xì)胞增殖
    3.6 TET1-CD抑制SMMC7721細(xì)胞遷移和侵襲
    3.7 TET1-CD抑制裸鼠腫瘤生長
    3.8 TET1-CD影響KI-67蛋白表達(dá)
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3073387