研究背景:衰老標(biāo)記蛋白-30（SMP30）存在三種可變剪接體,分別為全長（長度為900bp）、外顯子4缺失的轉(zhuǎn)錄本（長度為684bp）、外顯子4、5缺失的轉(zhuǎn)錄本（長度為552bp）。900bp的轉(zhuǎn)錄本表達(dá)的蛋白為SMP30-a,684bp的轉(zhuǎn)錄本表達(dá)的蛋白為SMP30-b,552bp的轉(zhuǎn)錄本表達(dá)的蛋白為SMP30-c。SMP30-a在肝癌組織中低表達(dá),對肝癌細(xì)胞的增殖和侵襲遷移具有抑制作用,關(guān)于SMP30-b和SMP30-c的研究較少。研究目的:本文通過構(gòu)建SMP30不同轉(zhuǎn)錄本慢病毒表達(dá)載體,在肝癌細(xì)胞中進(jìn)行過表達(dá),進(jìn)而研究SMP30不同蛋白亞型對肝癌細(xì)胞生物行為學(xué)的影響。研究方法:（1）構(gòu)建SMP30三個(gè)轉(zhuǎn)錄本的真核表達(dá)載體,通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,Western blot檢測驗(yàn)證SMP30三個(gè)轉(zhuǎn)錄本在真核細(xì)胞內(nèi)是否都能夠表達(dá)。（2）構(gòu)建SMP30三個(gè)轉(zhuǎn)錄本的慢病毒表達(dá)載體,用攜帶目的基因的慢病毒和空載慢病毒分別感染肝癌細(xì)胞SK-Hep-1,通過嘌呤霉素篩選后構(gòu)建出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SMP30轉(zhuǎn)錄本的過表達(dá)細(xì)胞株。（3）Quantitative Real-time PCR（qRT-PCR）... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

真核表達(dá)載體的PCR鑒定

圖 1-2 真核表達(dá)載體雙酶切鑒定lag，2：pEGFP-684-Flag，3：pEGFP-552-Flag，4：pEGFP-N1-Fig 1-2 Double enzyme digestion of Eukaryotic expression vector.lag，2：pEGFP-684-Flag，3：pEGFP-552-Flag，4：pEGFP-N1-

圖 1-3 SMP30 三個(gè)轉(zhuǎn)錄本轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞后融合蛋白表達(dá)熒光圖片F(xiàn)ig 1-3 Fluorescence images of 293T cell transfected with pEGFP-N1-Flag 、pEGFP-552-Flag，pEGFP-684-Flag and pEGFP-900-Flag.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3072984