實(shí)驗(yàn)背景:黑色素瘤作為目前發(fā)展最快、預(yù)后最為不良的惡性腫瘤之一,現(xiàn)已引起越來(lái)越廣泛的關(guān)注。侵襲和轉(zhuǎn)移是黑色素瘤最顯著的特征及影響患者生存的首要因素,也是其治療困難的一個(gè)重要原因。腫瘤的局部擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移是很多癌癥致死的主要原因,腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多因素綜合作用的復(fù)雜過(guò)程,涉及到多種黏附分子、基質(zhì)蛋白酶、細(xì)胞因子及相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制和相關(guān)的基因改變,其轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究是目前的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。最近的研究表明,分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑（secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI）既是炎癥抑制劑也是蛋白酶抑制劑,通過(guò)降解周邊組織參與腫瘤的發(fā)生與代謝。研究表明SLPI的表達(dá)水平與腫瘤遷移入侵能力呈正相關(guān),迄今為止,SLPI如何增強(qiáng)腫瘤遷移的惡性表型暫不清楚。本課題以黑色素瘤A375細(xì)胞作為研究對(duì)象,通過(guò)RT-PCR、Western Blot、明膠酶譜實(shí)驗(yàn)及Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SLPI促進(jìn)A375細(xì)胞遷移的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.RT-PCR結(jié)果顯示在A375 SLPI（+）細(xì)胞中MMP-2 m RNA水平?jīng)]有明顯變化,但是MMP-9 m... 

【文章來(lái)源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：103 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

預(yù)設(shè)信號(hào)通路Fig1.1Theproposedpathway

昆明理工大學(xué)研究生畢業(yè)2. 通過(guò)慢病毒包裝體系將質(zhì)粒包裝成慢病毒，并感染 A375 細(xì)胞，由于 A細(xì)胞本身 SLPI 表達(dá)水平很低，因此在 SLPI 過(guò)表達(dá)的基礎(chǔ)上加入 SLP擾的慢病毒，降低 SLPI 的表達(dá)；3. 通過(guò)流式細(xì)胞儀分選出感染成功的陽(yáng)性細(xì)胞系，培養(yǎng)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系；4. 通過(guò) RT-PCR 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證細(xì)胞系；5. 通過(guò) Western Blot 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證不同細(xì)胞系中相關(guān)蛋白表達(dá)量差異；6. 通過(guò)明膠酶譜實(shí)驗(yàn)確定基質(zhì)金屬蛋白酶 2/9(MMP-2/9)的表達(dá)量；7. 通過(guò) Transwell 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 SLPI 對(duì) A375 細(xì)胞遷移的影響。

昆明理工大學(xué)研究生畢業(yè)論文7. 氨芐青霉素溶液配制(Amp, 50mg/ml)稱取 5gAmpicillin 置于 100ml 離心管中，加入 80ml 超純水充分溶解后定容至 100ml，0.22μm 濾膜過(guò)濾除菌，小份分裝后置于-20℃保存。使用時(shí)，按 1:1000比例稀釋后使用，其工作濃度為 50μg/ml。2.2 SLPI 基因過(guò)表達(dá)體系的構(gòu)建2.2.1 引物設(shè)計(jì)根據(jù) NCBI 中人源 SLPI 編碼序列(NCBI Reference Sequence: NG_028137.1)及 pLVX-IRES-ZsGreen1 載體多克隆位點(diǎn)讀碼框(見(jiàn)圖 2.1)，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增 SLPI基因序列，引物兩端的酶切位點(diǎn)分別為 EcoRⅠ/XhoⅠ(表 2.1)。引物委托昆明碩擎生物科技有限公司合成。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Mnk kinase pathway: Cellular functions and biological outcomes[J]. Sonali Joshi,Leonidas C Platanias.  World Journal of Biological Chemistry. 2014(03)
[2]現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 陳惠,渠景連,龔婕寧.  中國(guó)中藥雜志. 2014(15)

博士論文
[1]Mnk2作為非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后因子及其分子基礎(chǔ)[D]. 彭桂林.南方醫(yī)科大學(xué) 2016
[2]CXCR4基因沉默對(duì)黑色素瘤侵襲和轉(zhuǎn)移影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 吳包金.第二軍醫(yī)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]青藤堿靶向巨噬細(xì)胞α7nAChR的抗炎機(jī)制的研究[D]. 朱瑞麗.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3066734