目的:免疫治療是目前除了傳統(tǒng)手術(shù)切除、放化療及靶向藥物治療外,最具有發(fā)展?jié)摿Φ男屡d腫瘤治療手段。免疫細(xì)胞傳輸治療是免疫治療的主要手段之一,雖然在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中的運(yùn)用達(dá)到了較好的治療效果,但其在實(shí)體腫瘤中的臨床應(yīng)答率卻不盡人意。實(shí)體腫瘤微環(huán)境中大量存在的免疫抑制因子,如活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）堆積導(dǎo)致的氧化應(yīng)激環(huán)境可造成免疫細(xì)胞的浸潤減少及功能損傷。自然殺傷（Natural Killer,NK）細(xì)胞作為固有淋巴細(xì)胞,對(duì)病毒感染的細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞可起到早期識(shí)別和殺傷作用。細(xì)胞因子白介素15（Interleukin-15,IL-15）則可促進(jìn)在NK細(xì)胞的增殖和活化。本研究旨在探究IL-15對(duì)自然殺傷細(xì)胞在腫瘤氧化應(yīng)激微環(huán)境中耐受能力的影響及其相關(guān)分子機(jī)制,并進(jìn)一步對(duì)NK細(xì)胞浸潤和IL-15表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌患者隊(duì)列中進(jìn)行了預(yù)后價(jià)值分析,從而為NK細(xì)胞免疫治療在非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用提供了新的研究思路和治療策略。方法:1.外周血來源的NK細(xì)胞分別利用IL-2和IL-15激活,經(jīng)靶細(xì)胞K562細(xì)胞刺激后,利用Cr-51釋放實(shí)驗(yàn)檢測其毒性殺傷能力;通過檢測N... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

HO處理后NK細(xì)胞胞內(nèi)ROS變化

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文第二章IL-15激活Trx提高NK細(xì)胞氧化應(yīng)激耐受能力39圖2.1IL-15可激活NK細(xì)胞的氧化還原酶系統(tǒng)（A）NK細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組C5GO功能基因集富集分析圖，按基因集所含基因數(shù)范圍為15-500個(gè)基因，標(biāo)準(zhǔn)化p<0.01條件篩選，Y軸代表ES最高的10個(gè)基因集，X軸為每個(gè)基因集所包含的基因個(gè)數(shù)。（B）IL-15激活NK細(xì)胞對(duì)比IL-2激活NK細(xì)胞的基因表達(dá)GSEA分析圖。（C）IL-15激活NK細(xì)胞對(duì)比IL-2激活NK細(xì)胞在GO：000302ResponsetoROS基因集中基因表達(dá)差異熱圖。2.3.2IL-15增加NK細(xì)胞的Trx表達(dá)并減少TXNIP的核外轉(zhuǎn)移基于GSEA結(jié)果及基因表達(dá)的熱圖分析，我們推測硫氧還蛋白系統(tǒng)在IL-15增強(qiáng)NK細(xì)胞抵御氧化應(yīng)激能力中起到重要作用。為了驗(yàn)證基因測序的對(duì)比結(jié)果，我們進(jìn)一步通過qRT-PCR在NK細(xì)胞中驗(yàn)證了TXN，TXN2，TXNIP和TXNRD1的表達(dá)情況。通過對(duì)比IL-2激活的NK細(xì)胞和IL-15激活的NK細(xì)胞，我們發(fā)現(xiàn)IL-15激活的NK細(xì)胞其TXN及TXN2表達(dá)升高，TXNIP表達(dá)顯著降低，而TXNRD1無顯著差異（圖2.2A）。硫氧還蛋白包括Trx-1及Trx-2，分別由TXN和TXN2基TXNTXNRD1TXNIPTXN2Donor1Donor2Donor3Donor4Donor5GO:0000302ResponsetoROSA.B.C.GeneNumber

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文第二章IL-15激活Trx提高NK細(xì)胞氧化應(yīng)激耐受能力41圖2.2IL-15增加NK細(xì)胞的Trx表達(dá)并減少TXNIP的核外轉(zhuǎn)移（A）NK細(xì)胞經(jīng)過IL-2或IL-15激活后硫氧還蛋白系統(tǒng)相關(guān)系列基因相對(duì)mRNA表達(dá)水平。(B)IL-2激活及IL-15激活的NK細(xì)胞Thioredoxin-1表達(dá)的代表性流式檢測圖及MFI對(duì)比，n=6。(C)IL-2及IL-15激活的NK細(xì)胞免疫熒光共聚焦圖（63X），綠色表示TXNIP蛋白，紅色MitoTracker表示胞內(nèi)線粒體，藍(lán)色DAPI表示細(xì)胞核，Scalebar=10μm。（D）免疫熒光共聚焦圖的NK細(xì)胞核內(nèi)范圍內(nèi)TXNIP數(shù)量定量統(tǒng)計(jì)。（E）免疫熒光共聚焦圖中線粒體中TXNIP的表達(dá)量定量TXNIPRelativemRANexpressionIL-2IL-150.00.51.01.5TXN2RelativemRANexpressionIL-2IL-1501234TXN1RelativemRANexpressionIL-2IL-150.00.51.01.52.02.5TXNRD1IL-2IL-150.00.51.01.5RelativemRANexpressionnsIL-2IL-150246810Thioredoxin1MFI(Foldchangetoisotype)IL-2IL-15IsotypeCountTrx1DAPI+TXNIPDAPI+MitoTrackerMergedIL-15IL-2IL-2IL-2+H2O2IL-15IL-15+H2O2050010001500TXNIPMFIinMitochondriansIL-2IL-2+H2O2IL-15IL-15+H2O2020406080TXNIPCountinNucleusA.B.C.D.E.


本文編號(hào)：3064329