第一部分NCI-H460源性肺癌干細胞樣細胞的擴增與鑒定目的從體外培養(yǎng)NCI-H460細胞系得到第2代球細胞,與NCI-H460細胞對照,鑒別NCI-H460細胞系第2代球細胞是否具有肺癌干細胞樣細胞（lung cancer stem-like cells,LCSLC）性質。方法干細胞條件培養(yǎng)基超低粘附培養(yǎng)板懸浮培養(yǎng)得到NCI-H460細胞系第2代球細胞。腫瘤球形成法對比測定NCI-H460細胞和NCI-H460細胞系第2代球細胞自我更新;創(chuàng)口愈合法和Transwell小室細胞侵襲試驗對比檢測細胞遷移和侵襲能力;藻紅蛋白（PE）標記流式細胞術和蛋白質印跡對比分析腫瘤干細胞標志物（CD133、CD44和ALDH1）和多能性轉錄因子（Bmi1、Nanog和OCT4）以及上皮間充質轉化（epithelial-mesenchmal transition,EMT）標志物（E-cadherin和N-cadherin）與EMT相關調節(jié)因子（Twist1和Snail1）蛋白表達水平;細胞有限稀釋裸鼠皮下移植瘤實驗對比檢查體內致瘤性。結果1.干細胞條件培養(yǎng)基超低粘附培養(yǎng)板懸浮培養(yǎng)獲得的NCI-H460源... 

【文章來源】：暨南大學廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：222 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

H460細胞系單層貼壁生長細胞的倒置相差顯微鏡圖像(放大倍率：200)

1-2 NCI- H460 細胞系不同球細胞傳代培養(yǎng)次數(shù)的球形成率比原代(第 1 代)、第 2 代、第 3 代和第 4 代球細胞的球形成率。與原代球細.05。 P<0.05，與第 1 次、第 2 次和第 4 次球細胞培養(yǎng)相比：#P<0.05。±標準差(Mean±SD, n=3)。確定 NCI-H460 細胞系第 2 代球細胞具有自我更新能力，我們球細胞懸液稀釋成每毫升 500 個細胞的密度，然后，稀釋的單L 接種于超低粘附 96 孔培養(yǎng)板(Corning Inc., Corning, NY, USA干細胞條件培養(yǎng)基。標記只有一個細胞的孔，觀察單個細胞成在接種的第 1d、第 3d、第 6d 和第 9d 照相。圖 1-3 可見：隨隆性非粘附 NCI-H460 源性腫瘤球逐漸增大。

圖 1-2 NCI- H460 細胞系不同球細胞傳代培養(yǎng)次數(shù)的球形成率比較圖示原代(第 1 代)、第 2 代、第 3 代和第 4 代球細胞的球形成率。與原代球細胞培養(yǎng)相比：*P<0.05。 P<0.05，與第 1 次、第 2 次和第 4 次球細胞培養(yǎng)相比：#P<0.05。3 次獨立實驗的均數(shù)±標準差(Mean±SD, n=3)。為了確定 NCI-H460 細胞系第 2 代球細胞具有自我更新能力，我們將分散得到的單個球細胞懸液稀釋成每毫升 500 個細胞的密度，然后，稀釋的單細胞懸液每孔 2 μL 接種于超低粘附 96 孔培養(yǎng)板(Corning Inc., Corning, NY, USA)，再加入150 μL 干細胞條件培養(yǎng)基。標記只有一個細胞的孔，觀察單個細胞成球的時間過程，并在接種的第 1d、第 3d、第 6d 和第 9d 照相。圖 1-3 可見：隨著時間的延長，克隆性非粘附 NCI-H460 源性腫瘤球逐漸增大。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]7-difluoromethoxyl-5,4’-di-n-octylgenistein inhibits growth of gastric cancer cells through downregulating forkhead box M1[J]. Hong-Lin Xiang, Fei Liu, Mei-Fang Quan, Jian-Guo Cao, Yuan Lv, Laboratory of Medical Engineering, Medical College, Hunan Normal University, Changsha 410013, Hunan Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(33)



本文編號：3064194