發(fā)布時間：2021-03-03 17:03

　　第一部分:PRSS3-SPINKs-KLK5通路在肺腺癌增殖與轉(zhuǎn)移過程中的作用及機(jī)制探討目的:通過臨床、細(xì)胞生物學(xué)及生物信息學(xué)等相關(guān)研究方法探索PRSS3基因在肺腺癌增殖與侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及機(jī)制。方法:我們采用生物信息學(xué)方法采集分析了多個基因芯片數(shù)據(jù)庫中肺腺癌PRSS3的表達(dá)水平,并分析了其與預(yù)后的關(guān)系。通過慢病毒shRNA感染技術(shù)敲低了肺腺癌細(xì)胞A549、HCC827及PC9中PRSS3基因的表達(dá),并觀察對其增殖、侵襲遷移能力的影響;為明確PRSS3作用的下游信號通路,我們在PRSS3敲低的PC9細(xì)胞中收集無血清培養(yǎng)液,濃縮后Western Blot分析了濃縮培養(yǎng)液中SPINKs、KLK5及其下游蛋白的表達(dá)情況,并通過免疫共沉淀（Co-IP）分析在培養(yǎng)液中是否存在SPINKs與KLK5的結(jié)合。最后我們設(shè)計(jì)小鼠動物模型驗(yàn)證PRSS3在肺腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用,并探究Mesotrypsin（PRSS3的編碼蛋白）抑制劑對肺腺癌PC9細(xì)胞系增殖、遷移的影響。結(jié)果:Oncomine數(shù)據(jù)庫綜合分析結(jié)果顯示PRSS3的表達(dá)水平在肺腺癌中較正常肺肺組織中更高;同時K-Mplotter數(shù)據(jù)庫分析發(fā)... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
英文摘要
縮略詞表
前言
第一部分 PRSS3-SPINKs-KLK5通路在肺腺癌增殖與轉(zhuǎn)移過程中的作用及機(jī)制探討
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 細(xì)胞株
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器材料
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4 動物實(shí)驗(yàn)
        2.5 統(tǒng)計(jì)方法
    3 結(jié)果
        3.1 PRSS3在肺腺癌和正常組織中表達(dá)及對預(yù)后的影響
        3.2 PRSS3在肺腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)及細(xì)胞系篩選
        3.3 PRSS3基因沉默對三種肺腺癌細(xì)胞系表型的影響
        3.4 Mesotrypsin抑制劑對PC9肺腺癌細(xì)胞增殖及侵襲遷移的影響
        3.5 PRSS3影響肺腺癌細(xì)胞系PC9表型的下游信號通路研究
        3.6 活性Mesotrypsin作用對PC9細(xì)胞培養(yǎng)液中KLK5活性的影響
        3.7 KLK5引起PC9細(xì)胞表型變化的下游效應(yīng)分子
        3.8 小鼠原位注射PRSS3敲低的肺腺癌PC9細(xì)胞動物模型驗(yàn)證
    4 討論
    5 結(jié)論
    6 參考文獻(xiàn)
第二部分 PRSS3在肺鱗癌增殖與轉(zhuǎn)移過程中作用的初步探索
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 細(xì)胞株
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器材料
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4 統(tǒng)計(jì)方法
    3 結(jié)果
        3.1 PRSS3在肺鱗癌和正常組織中的表達(dá)比較
        3.2 PRSS3表達(dá)水平與肺鱗癌患者預(yù)后的關(guān)系
        3.3 篩選PRSS3高表達(dá)的肺鱗癌細(xì)胞系
        3.4 PRSS3基因沉默可降低對肺鱗癌侵襲遷移能力的影響
        3.5 PRSS3及KLK5基因沉默對SNAIL1及AKT/p-AKT水平的影響
    4 討論
    5 緒論
    6 參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]人Kazal型絲氨酸蛋白酶抑制因子抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J]. 馮潔,倫永志.  大連大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(03)
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博士論文
[1]克氏原螯蝦Kazal型絲氨酸蛋白酶抑制因子基因克隆、表達(dá)及功能分析[D]. 李新蒼.山東大學(xué) 2010



本文編號：3061610