研究背景及目的:高遷移率蛋白A2（high-mobilitygroup AT-hook2,HMGA2）屬于高遷移率蛋白超家族成員,是一種非組蛋白染色質(zhì)結(jié)合蛋白。通過三個AT-hook區(qū)高親和力的結(jié)合到基因組中AT富集的區(qū)域,從而改變?nèi)旧|(zhì)的空間構(gòu)象,進而發(fā)揮基因表達調(diào)控功能。HMGA2主要在動物的胚胎期高表達,而在正常成體組織中表達量很低或幾乎不表達,HMGA2突變或缺失的動物表現(xiàn)出嚴重的胎兒發(fā)育阻滯以及明顯的侏儒表型,表明HMGA2主要與動物的胚胎發(fā)育有關(guān),參與動物的生長發(fā)育調(diào)節(jié);此外,研究發(fā)現(xiàn)在大部分腫瘤細胞中HMGA2也相對于癌旁組織高表達,而且參與了腫瘤細胞的增殖、遷移、侵襲等致瘤過程,還與患者的預(yù)后不良有關(guān),表明HMGA2也是一個重要的致癌因子。綜合以上信息,本課題首先探究了 HMGA2在肝癌細胞系HepG2中的作用,檢測HMGA2的失活對于肝癌細胞相關(guān)代謝、生長、增殖的影響;其次,以兔為模式動物,期望采用CRISPR/Cas9系統(tǒng)敲除HMGA2基因制備侏儒兔模型,為實驗動物微型化以及侏儒癥研究提供一種模型動物。研究方法:（1）在人的HMGA2基因第一外顯子和第二外顯子處各設(shè)... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＨＭＧＡ２在不同組織樣本中的表達??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＭＧＡ２?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｕｍｏｒ?ｔｉｓｓｕｅｓ??

?頌士學(xué)位論文???２．４．２?ｓｇＲＮＡ?設(shè)計??采用在線ｓｇＲＮＡ設(shè)計軟件，在人ＨＭＧＡ２基因的第一外顯子與第二外顯子處各設(shè)計??一對ｓｇＲＮＡ，分別命名為ｓｇＥｌ和ｓｇＥ２?（如圖２－２）。為了便于與Ｂｂｓｌ酶切的ＰＸ４５８載體??連接，需在ｓｇＲＮＡ正義鏈的５＇端添加ＣＡＣＣ接頭，反義鏈的３端添加ＡＡＡＣ接頭。此外，??由于ｓｇＥ２的５端不是以Ｇ開頭，為了提高Ｕ６啟動子的活性，需在ｓｇＥ２的５＇端額外添加一??個Ｇ。最終得到的ｓｇＲＮＡ?ｏｌｉｇｏ序列如表２－１所示。??ＡＣＡＡＴＴＡＧＧＡＡＣＣＡＡＣＣＧＧＴＧＡＧＣＣＣＴＣＴＣＣＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＡＧＧＧＧＡ??ＴＧＴＴＡＡＴＣＣＴＴＧＧｒＴＧＧＣＣＡＣＴＣＧＧＧＡＧＡＧＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＧＴＣＣＣＣＴ??—??ＰＡＭ?ｓｂＥ２???????Ｅｌ?Ｅ２?Ｅ３?Ｅ４?Ｅ５??＿?ｔ?—?：．６ｋｂ?＿??＾ＣＡＡＣＣＴＧＣＣＧＣＣＣＣＡＧＣＧＣＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＣＧＣＧＧＣＣＧＣＣＣＣＡＧＧ??ＧＴＴＧＧＡＣＧＧＣＧＧＧＧＴＣＧＣＧＧＡＧＴＣＴＴＣＴＣＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＧＧＴＣＣ??ＰＡＭ??圖２－２?ｓｇＲＮＡ位點??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｔｈｅ?ｌｏｃｕｓ?ｏｆ?ｓｇＲＮＡ??表２－１?ｓｇＲＮＡ?ｏｌｉｇｏ序列??Ｔａｂｌｅ?２－１１＇ｈｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ｓｇＲＮＡ?ｏｌｉｇｏ??序列名稱?序列（５＇—３＇）??Ｎａｍｅ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?（５’—３＇）??ｓｇＥｌ－Ｔ?ＣＡＣＣＧＴＣＣＴＣＴＣＴＴＣＴＧＡＧＧＣＧＣＴ??ｓｇＥｌ－Ｂ?ＡＡＡＣＡＧＣＧＣＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＡ

圖２－３?ＰＸ４５８酶切結(jié)果（Ｍ：?ＤＬ１５０００ｍａｒｋｅｒ，?Ｌｉｎｅｌ：ＰＸ４５８，Ｌｉｎｅ２：ＰＸ４５８酶切）??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]高遷移率族蛋白A2與原發(fā)性肝細胞癌患者臨床病理特征及其預(yù)后的關(guān)系[J]. 楊晉,夏先明,賀凱,張孟瑜,馮春紅,秦蜀.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2019(24)
[2]PCOS易感基因Hmga2在小鼠子宮蛻膜化中的表達與調(diào)節(jié)[J]. 曹永芝,趙躍然,林德貴.  中國實驗動物學(xué)報. 2017(05)



本文編號：3053919