目的:制備可識別腫瘤細(xì)胞表達(dá)CD47蛋白的抗CD47單克隆抗體,并鑒定其抗腫瘤作用。方法:利用BL21（DE3）原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)CD47胞外段蛋白,利用Ni-NTA層析純化表達(dá)蛋白。免疫BALB/c小鼠,制備并篩選分泌抗CD47單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。利用正辛酸-硫酸銨沉淀方法純化抗CD47單抗。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測純化抗體的活性。利用巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)試驗(yàn),檢測抗CD47單抗的抗腫瘤作用。結(jié)果:表達(dá)并純化了CD47胞外段蛋白,篩選到了分泌抗CD47單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株—7D4,流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,抗體具有結(jié)合腫瘤細(xì)胞的活性,但是對不同腫瘤類型細(xì)胞的結(jié)合效率存在差異。巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),利用抗體封閉腫瘤細(xì)胞CD47信號后,可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的吞噬作用。結(jié)論:抗CD47單抗—7D4可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬作用,具有潛在應(yīng)用價值。 

【文章來源】：現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2020,28(18)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 CD47基因胞外段擴(kuò)增
        1.2.2 pRSETC/CD47重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2.3 CD47蛋白原核表達(dá)及純化
        1.2.4 抗CD47單抗雜交瘤制備
        1.2.5 抗CD47單抗純化
        1.2.6 抗CD47單抗活性檢測
        1.2.7 抗CD47抗腫瘤活性鑒定
2 結(jié)果
    2.1 CD47原核表達(dá)及純化效果鑒定
    2.2 抗CD47單抗純化效果鑒定
    2.3 抗CD47單抗活性鑒定
    2.4 抗CD47單抗的促吞噬作用
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