目的:制備可識別腫瘤細胞表達CD47蛋白的抗CD47單克隆抗體,并鑒定其抗腫瘤作用。方法:利用BL21（DE3）原核表達系統(tǒng)表達CD47胞外段蛋白,利用Ni-NTA層析純化表達蛋白。免疫BALB/c小鼠,制備并篩選分泌抗CD47單克隆抗體的雜交瘤細胞株。利用正辛酸-硫酸銨沉淀方法純化抗CD47單抗。利用流式細胞術檢測純化抗體的活性。利用巨噬細胞與腫瘤細胞共培養(yǎng)試驗,檢測抗CD47單抗的抗腫瘤作用。結果:表達并純化了CD47胞外段蛋白,篩選到了分泌抗CD47單克隆抗體的雜交瘤細胞株—7D4,流式細胞術檢測結果顯示,抗體具有結合腫瘤細胞的活性,但是對不同腫瘤類型細胞的結合效率存在差異。巨噬細胞與腫瘤細胞共培養(yǎng)試驗發(fā)現(xiàn),利用抗體封閉腫瘤細胞CD47信號后,可以增強巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬作用。結論:抗CD47單抗—7D4可以促進巨噬細胞的吞噬作用,具有潛在應用價值。 

【文章來源】：現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學. 2020,28(18)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 實驗方法
        1.2.1 CD47基因胞外段擴增
        1.2.2 pRSETC/CD47重組表達質粒構建
        1.2.3 CD47蛋白原核表達及純化
        1.2.4 抗CD47單抗雜交瘤制備
        1.2.5 抗CD47單抗純化
        1.2.6 抗CD47單抗活性檢測
        1.2.7 抗CD47抗腫瘤活性鑒定
2 結果
    2.1 CD47原核表達及純化效果鑒定
    2.2 抗CD47單抗純化效果鑒定
    2.3 抗CD47單抗活性鑒定
    2.4 抗CD47單抗的促吞噬作用
3 討論



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