發(fā)布時(shí)間：2021-02-26 22:25

　　背景:c-Myc原癌基因是Myc基因家族的主要成員之一,是骨髓性細(xì)胞白血病病毒的癌基因v-Myc的同類物,在8q24.12-8q24.13染色體上定位,該基因編碼產(chǎn)物為c-Myc蛋白。c-Myc蛋白是一個(gè)具有螺旋環(huán)螺旋/亮氨酸拉鏈的轉(zhuǎn)錄因子,它能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖。c-Myc蛋白和Max蛋白可以在螺旋環(huán)螺旋/亮氨酸拉鏈處形成二聚體,c-Myc/Max復(fù)合物可以綁定DNA的E-box區(qū)（5’CANNTG 3’）,該區(qū)域一般是啟動(dòng)子所在位置。在人類的很多腫瘤細(xì)胞中c-Myc蛋白均高表達(dá),其原因是c-Myc基因發(fā)生了突變或是被大量轉(zhuǎn)錄。B-lineage acute lymphoblastic leukemia（B-ALL）是一種急性B淋巴瘤白血病,具有很強(qiáng)的增殖能力和侵染能力,c-Myc在該類疾病的發(fā)生在扮演著重要角色,但其治病機(jī)制尚不清楚。為了進(jìn)一步闡述其致病機(jī)理,該實(shí)驗(yàn)中我們用Raji細(xì)胞建立了c-Myc細(xì)胞沉默模型Raji-KD,發(fā)現(xiàn)c-Myc可以通過影響組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶TIP60,MOF的表達(dá)來影響組蛋白H₄的乙�；�,從而調(diào)節(jié)CDK1,cyclin B1的表達(dá)... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 c-Myc-siRNA Raji細(xì)胞沉默模型和恢復(fù)模型的構(gòu)建和鑒定
    材料和方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 相關(guān)試劑配制
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 c-Myc基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體包裝與沉默模型和恢復(fù)恢復(fù)模型構(gòu)建
                2.2.1 最佳干擾序列的篩選和病毒包裝
                2.2.2 Raji-KD細(xì)胞模型建立
                2.2.3 Raji-KD-Re細(xì)胞模型建立
            2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡分析（western bloting）
            2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析（Real-time PCR）
            2.5 抗體稀釋倍數(shù)
    結(jié)果
        （1）c-Myc最佳干擾序列的PCR檢測(cè)
        （2）pSINsi-hU6-c-Myc重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Raji細(xì)胞
        （3）穩(wěn)定下調(diào)c-Myc表達(dá)單克隆及恢復(fù)c-Myc表達(dá)細(xì)胞株的鑒定
    討論
    結(jié)論
第二部分 c-Myc蛋白的低表達(dá)對(duì)Raji細(xì)胞增殖能力的影響
    材料和方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 相關(guān)試劑配制
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞活力測(cè)定（MTT、BrdU）
            2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
    結(jié)果
        （1）MTT、BrdU檢測(cè)細(xì)胞活性及SCID小鼠體內(nèi)實(shí)體瘤的形成
    討論
    結(jié)論
第三部分 c-Myc蛋白的低表達(dá)對(duì)Raji細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響
    材料和法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 相關(guān)試劑配制
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞周期檢測(cè)
            2.2 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.3 免疫組化
    結(jié)果
        （1）c-Myc蛋白低表達(dá)對(duì)Raji-KD細(xì)胞周期影響
        （2）c-Myc蛋白低表達(dá)對(duì)Raji-KD細(xì)胞凋亡影響
    討論
    結(jié)論
第四部分 c-Myc通過組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶的表達(dá)影響細(xì)胞周期
    材料和方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 相關(guān)試劑配制
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
            2.2 染色體免疫共沉淀（ChIP）
    結(jié)果
        （1）c-Myc調(diào)控周期蛋白CDK1、cyclinB和乙�；D(zhuǎn)移酶Tip60
4的乙�；鹬芷诘鞍譪yclinB和CDK1等周期基因的變化">        （2） c-Myc通過組蛋白H₄的乙�；鹬芷诘鞍譪yclinB和CDK1等周期基因的變化
    討論
    結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 c-Myc與腫瘤的發(fā)生及其生物學(xué)功能
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號(hào)：3053261