惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅我國居民健康的重大疾病。近年來,隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展,腫瘤的診治模式已發(fā)生了翻天覆地的變化,腫瘤患者的臨床獲益也取得了令人鼓舞的提高。以EGFR敏感突變的非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung carcinoma,NSCLC）以例,相比于傳統(tǒng)的化學(xué)治療,經(jīng)EGFR酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKI）治療的無進展生存時間（PFS）已由過去的6個月提高至近20個月。然而即便TKI藥物的有效反應(yīng)率已高達(dá)70%,但隨著治療時間的延長,仍不可避免地發(fā)生耐藥性的問題。及早發(fā)現(xiàn)耐藥并及時更換治療方案已成為提升腫瘤患者生存的關(guān)鍵�，F(xiàn)有方法與資料表明,目前臨床上TKI藥物耐藥性檢測方法的靈敏度較低（1%左右）,同時對樣本需求量高（穿刺樣本量通常不高）,已不滿足部分特殊病患的需求。一種多重、靈敏、便捷的耐藥性檢測方法能夠提前及時發(fā)現(xiàn)耐藥性,對于用藥指導(dǎo)以及預(yù)后具有很高的臨床意義。因此耐藥性檢測方法仍是一個急需解決的臨床難題。根據(jù)耐藥性的分子機制進行后續(xù)針對性治療是精準(zhǔn)醫(yī)療的重要內(nèi)容,然而耐藥性發(fā)生后的分子變異是相當(dāng)復(fù)雜的�，F(xiàn)仍有15-30%病例的TKI耐藥機制尚不清楚。先... 

【文章來源】：河北醫(yī)科大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

數(shù)字PCR實驗流程圖

連接反應(yīng)的溫度是保證連接效率最為重要的因素之一。我們通過NEB公司的Thermostable Ligase Reaction Temperature Calculator v0.8.4在線工具(http://ligasecalc.neb.com/#!/ligation)來預(yù)測連接的最適溫度。在本研究中43℃是比較理想的連接反應(yīng)溫度。利用熒光定量PCR對鎖式探針的濃度梯度進行比較研究發(fā)現(xiàn),0.1 pM是比較理想的濃度(圖1)。3 MPRP方法的特異性與靈敏度

為研究MPRP反應(yīng)的可行性與特異性,三組鎖式突變探針被設(shè)計用來在鎖式RCA反應(yīng)中檢測三組含有突變的模板。探針pEG858A與pEG858C分別匹配模板tEG858T與tEG858G。同樣,探針pEG790G與pEG790A分別匹配模板tEG790C與tEG790T;探針pBR600A與pBR600T分別匹配模板tBR600T與tBR600A。(序列見表2)在多重定量PCR反應(yīng)中使用一對通用引物與三條標(biāo)記有不同熒光基團的熒光探針來實現(xiàn)多重檢測(MPRP示意圖見圖3)。結(jié)果如表2所示,當(dāng)鎖式突變探針與突變模板完全匹配時,MPRP反應(yīng)所檢測到的突變模板CT值分別達(dá)到9.74±0.565、7.99±0.143和15.27±0.243(圖2)。在野生模板中并未觀察到CT值。這結(jié)果證明利用MPRP反應(yīng)檢測多重突變是可行并且特異的。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]FGFR1抑制劑PD173074經(jīng)誘導(dǎo)自噬逆轉(zhuǎn)人肺腺癌HCC827細(xì)胞對厄羅替尼耐藥[J]. 劉勇世,張志培,賴遠(yuǎn)陽,李小飛,王小平,雷杰.  臨床與病理雜志. 2019(11)
[2]奧希替尼治療EGFR T790M陽性非小細(xì)胞肺癌的臨床療效[J]. 王如坤,張振亮,邱斌,于顏紅.  臨床肺科雜志. 2019(07)
[3]EGFR抑制劑耐藥拮抗策略在非小細(xì)胞肺癌治療中的進展[J]. 何沛敏,童欣,李冠武.  汕頭大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2019(02)
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[9]奧希替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌耐藥機制研究進展[J]. 母予馨,李峻嶺.  癌癥進展. 2018(09)
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碩士論文
[1]血漿ctDNA檢測在晚期非小細(xì)胞肺癌患者EGFR-TKI治療中的應(yīng)用研究[D]. 范軍振.中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院 2018
[2]分子靶向藥物在非小細(xì)胞肺癌中的研究進展[D]. 賈仲飛.河北醫(yī)科大學(xué) 2018
[3]FGFR1基因擴增與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性研究[D]. 王雨亮.濟南大學(xué) 2017
[4]癌癥基因組特征性變異研究[D]. 張心愿.福州大學(xué) 2016
[5]滾環(huán)擴增快速檢測HBV替諾福韋耐藥突變位點研究[D]. 林鐘勸.第三軍醫(yī)大學(xué) 2013



本文編號：3052098