生物鐘蛋白REV-ERB激動劑SR9009對小細胞肺癌的作用及機制研究
發(fā)布時間:2021-02-20 13:02
[研究背景]小細胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)是一種惡性程度極高的腫瘤,標準治療手段為化療,但患者往往容易對化療藥產生抗性,導致治療失敗,因此需要探索一種新的治療策略。生物鐘在調節(jié)細胞增殖和新陳代謝,影響疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,尤其是與腫瘤的形成密切相關,藥物干預腫瘤細胞的生物鐘蛋白可能是治療腫瘤的有效治療方法。SR9009是REV-ERB蛋白(一種基本的生物鐘組件)的特定合成靶向激動劑,有研究表明SR9009可以通過對生物鐘蛋白REV-ERB的藥理作用調節(jié)自噬過程從而殺傷神經膠質瘤等腫瘤,但具體分子調控機制尚未完全闡明,而該藥物在小細胞肺癌(SCLC)中的抗腫瘤作用及機制還未有報道,值得進一步探究。[研究方法]1、利用化療敏感細胞(H69和H446)以及相應的化療耐藥細胞(H69AR和H446DDP)來評估REV-ERB激動劑SR9009對小細胞肺癌細胞惡性生物學行為的影響,并進一步驗證其在小細胞肺癌皮下成瘤模型中的抗腫瘤作用。2、采用免疫印跡實驗(Western Blot)和實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time ...
【文章來源】:南方醫(yī)科大學廣東省
【文章頁數】:73 頁
【學位級別】:碩士
【部分圖文】:
圖1-4?SR9009在體內對小細胞肺癌表現出顯著的抗腫瘤作用
?第二章?SR9009通過激活REV-ERB蛋白抑制自噬進而發(fā)揮抗腫瘤作用???(圖2-1D、E?),SR9009對小細胞肺癌細胞的殺傷作用在REV-ERBa被下調??后部分減弱(圖2-1?F、G)。這些結果表明,生物鐘蛋白REV-ERBa參與SR9009??抗小細胞肺癌作用。??A?B??,?H69AR?Concentration?(uM>?1.5,?REV-ERBa??,#?Z,/?REV-ERBa?4?jit?S???1^1.0?A??,明。?鰣■麵?p-actin??!?'?I?I??REVERBS??REV?ERBP?Wfr???*?15?SR9009(mM)??P?H44finnp?Concentration?(pM)?=?^?REV-ERBa??0?1.25?2.5?5 ̄To"?||?1.0?[fin?[rl?PI?rn??REV-ERBa?mm?mm???I??^??1?I?g?0.5.?■??p-actin??鬥?uCQAD?〇〇H^f平If-??p?□?H69AR?SR9009((JM)??^?151?□?H69AR+SR9009.?^??10]?口?H446DDP??.2?X?.2?□?H446DDP+SR9009??i1〇-?Hi?m?i?^??藝?T?^??〇?r-U?5?jJL.??芯?0.5_?%?0.5-??1?n?1?i?n??〇〇_。撸?L-rJ???Lpl?1—?0.0-1—1?M???M???BmaM?Clock?Bma"?Clock??D?E?,y,??|?15"?H69AR
a蛋白的下游靶標??REV-ERBa可以通過與其下游基因啟動子結合來抑制靶基因轉錄。已有研??究報道過REV-ERBa可以通過調節(jié)自噬基因ULK1抑制斑馬魚的自噬活性[321。??然而,這種機制在小細胞肺癌中是否有效尚不清楚。我們從Chip-seq的結果得??出,核心自噬基因?ATG5,?ATG2A,ATG4C,ATG7,?ATG13,?ATG16L1,ATG101,??AMBRA1,DRAM2和Ulkl都存在峰值,表明REV-ERBa可能與小細胞肺癌細??胞中自噬基因的啟動子結合(圖2-2?A)。為了尋找REV-ERBa直接結合的自噬??基因,我們進行細胞學驗證,用SR9009處理H69AR細胞后通過QRT-PCR實??驗得出ATG5,ATG2A,ATG7,ATG16L1和ATG101等基因的表達均被明顯??抑制(圖2-2?B);進一步在H446DDP細胞驗證,用SR9009處理H446DDP細??胞后再次利用QRT-PCR實驗證實,與對照組相比,SR9009作用后的細胞中??ATG5的表達被顯著抑制(圖2-2?C)。結合兩株小細胞肺癌細胞的實驗結果可??以得出核心自噬基因ATG5是REV-ERBa蛋白的下游靶基因。??A??CntwrMonnr?t?Peak?Chromo?om*?11??P**k??P??k??■??NR101??‘‘II*?.x.?-i?k.?.?L?i?A?.ii._?—?kt.?_?_?-?.?-?.?A?.?NR1D1?瀛?>??-?lAAA?Jki?.?ti??lopu,?.?.?.?.?,npu,?t?i?■??m?i?n?(i??????i?ai?
本文編號:3042809
【文章來源】:南方醫(yī)科大學廣東省
【文章頁數】:73 頁
【學位級別】:碩士
【部分圖文】:
圖1-4?SR9009在體內對小細胞肺癌表現出顯著的抗腫瘤作用
?第二章?SR9009通過激活REV-ERB蛋白抑制自噬進而發(fā)揮抗腫瘤作用???(圖2-1D、E?),SR9009對小細胞肺癌細胞的殺傷作用在REV-ERBa被下調??后部分減弱(圖2-1?F、G)。這些結果表明,生物鐘蛋白REV-ERBa參與SR9009??抗小細胞肺癌作用。??A?B??,?H69AR?Concentration?(uM>?1.5,?REV-ERBa??,#?Z,/?REV-ERBa?4?jit?S???1^1.0?A??,明。?鰣■麵?p-actin??!?'?I?I??REVERBS??REV?ERBP?Wfr???*?15?SR9009(mM)??P?H44finnp?Concentration?(pM)?=?^?REV-ERBa??0?1.25?2.5?5 ̄To"?||?1.0?[fin?[rl?PI?rn??REV-ERBa?mm?mm???I??^??1?I?g?0.5.?■??p-actin??鬥?uCQAD?〇〇H^f平If-??p?□?H69AR?SR9009((JM)??^?151?□?H69AR+SR9009.?^??10]?口?H446DDP??.2?X?.2?□?H446DDP+SR9009??i1〇-?Hi?m?i?^??藝?T?^??〇?r-U?5?jJL.??芯?0.5_?%?0.5-??1?n?1?i?n??〇〇_。撸?L-rJ???Lpl?1—?0.0-1—1?M???M???BmaM?Clock?Bma"?Clock??D?E?,y,??|?15"?H69AR
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本文編號:3042809
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