[研究背景]小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）是一種惡性程度極高的腫瘤,標(biāo)準(zhǔn)治療手段為化療,但患者往往容易對化療藥產(chǎn)生抗性,導(dǎo)致治療失敗,因此需要探索一種新的治療策略。生物鐘在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和新陳代謝,影響疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,尤其是與腫瘤的形成密切相關(guān),藥物干預(yù)腫瘤細(xì)胞的生物鐘蛋白可能是治療腫瘤的有效治療方法。SR9009是REV-ERB蛋白（一種基本的生物鐘組件）的特定合成靶向激動劑,有研究表明SR9009可以通過對生物鐘蛋白REV-ERB的藥理作用調(diào)節(jié)自噬過程從而殺傷神經(jīng)膠質(zhì)瘤等腫瘤,但具體分子調(diào)控機制尚未完全闡明,而該藥物在小細(xì)胞肺癌（SCLC）中的抗腫瘤作用及機制還未有報道,值得進(jìn)一步探究。[研究方法]1、利用化療敏感細(xì)胞（H69和H446）以及相應(yīng)的化療耐藥細(xì)胞（H69AR和H446DDP）來評估REV-ERB激動劑SR9009對小細(xì)胞肺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響,并進(jìn)一步驗證其在小細(xì)胞肺癌皮下成瘤模型中的抗腫瘤作用。2、采用免疫印跡實驗（Western Blot）和實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time ... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－４?ＳＲ９００９在體內(nèi)對小細(xì)胞肺癌表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤作用

?第二章?ＳＲ９００９通過激活ＲＥＶ－ＥＲＢ蛋白抑制自噬進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤作用???（圖２－１Ｄ、Ｅ?），ＳＲ９００９對小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的殺傷作用在ＲＥＶ－ＥＲＢａ被下調(diào)??后部分減弱（圖２－１?Ｆ、Ｇ）。這些結(jié)果表明，生物鐘蛋白ＲＥＶ－ＥＲＢａ參與ＳＲ９００９??抗小細(xì)胞肺癌作用。??Ａ?Ｂ??，?Ｈ６９ＡＲ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｕＭ＞?１．５，?ＲＥＶ－ＥＲＢａ??，＃?Ｚ，／?ＲＥＶ－ＥＲＢａ?４?ｊｉｔ?Ｓ?？?１＾１．０?Ａ??，明。？鰣■麵?ｐ－ａｃｔｉｎ?？！?＇?Ｉ?Ｉ??ＲＥＶＥＲＢＳ??ＲＥＶ?ＥＲＢＰ?Ｗｆｒ?？？＊?１５?ＳＲ９００９（ｍＭ）??Ｐ?Ｈ４４ｆｉｎｎｐ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｐＭ）?＝?＾?ＲＥＶ－ＥＲＢａ??０?１．２５?２．５?５￣Ｔｏ＂?｜｜?１．０?［ｆｉｎ?［ｒｌ?ＰＩ?ｒｎ??ＲＥＶ－ＥＲＢａ?ｍｍ?ｍｍ?？?Ｉ??＾?？１?Ｉ?ｇ?０．５．?■??ｐ－ａｃｔｉｎ??鬥?ｕＣＱＡＤ?〇〇Ｈ＾ｆ平Ｉｆ－??ｐ?□?Ｈ６９ＡＲ?ＳＲ９００９（（ＪＭ）??＾?１５１?□?Ｈ６９ＡＲ＋ＳＲ９００９．?＾??１０］?口?Ｈ４４６ＤＤＰ??．２?Ｘ?．２?□?Ｈ４４６ＤＤＰ＋ＳＲ９００９??ｉ１〇－?Ｈｉ?ｍ?ｉ?＾??藝?Ｔ?＾??〇?ｒ－Ｕ?５?ｊＪＬ．??芯?０．５＿?％?０．５－??１?ｎ?１?ｉ?ｎ??〇〇＿！＿！?Ｌ－ｒＪ???Ｌｐｌ?１—?０．０－１—１?Ｍ???Ｍ???ＢｍａＭ?Ｃｌｏｃｋ?Ｂｍａ＂?Ｃｌｏｃｋ??Ｄ?Ｅ?，ｙ，??｜?１５＂?Ｈ６９ＡＲ

ａ蛋白的下游靶標(biāo)??ＲＥＶ－ＥＲＢａ可以通過與其下游基因啟動子結(jié)合來抑制靶基因轉(zhuǎn)錄。已有研??究報道過ＲＥＶ－ＥＲＢａ可以通過調(diào)節(jié)自噬基因ＵＬＫ１抑制斑馬魚的自噬活性［３２１。??然而，這種機制在小細(xì)胞肺癌中是否有效尚不清楚。我們從Ｃｈｉｐ－ｓｅｑ的結(jié)果得??出，核心自噬基因?ＡＴＧ５，?ＡＴＧ２Ａ，ＡＴＧ４Ｃ，ＡＴＧ７，?ＡＴＧ１３，?ＡＴＧ１６Ｌ１，ＡＴＧ１０１，??ＡＭＢＲＡ１，ＤＲＡＭ２和Ｕｌｋｌ都存在峰值，表明ＲＥＶ－ＥＲＢａ可能與小細(xì)胞肺癌細(xì)??胞中自噬基因的啟動子結(jié)合（圖２－２?Ａ）。為了尋找ＲＥＶ－ＥＲＢａ直接結(jié)合的自噬??基因，我們進(jìn)行細(xì)胞學(xué)驗證，用ＳＲ９００９處理Ｈ６９ＡＲ細(xì)胞后通過ＱＲＴ－ＰＣＲ實??驗得出ＡＴＧ５，ＡＴＧ２Ａ，ＡＴＧ７，ＡＴＧ１６Ｌ１和ＡＴＧ１０１等基因的表達(dá)均被明顯??抑制（圖２－２?Ｂ）；進(jìn)一步在Ｈ４４６ＤＤＰ細(xì)胞驗證，用ＳＲ９００９處理Ｈ４４６ＤＤＰ細(xì)??胞后再次利用ＱＲＴ－ＰＣＲ實驗證實，與對照組相比，ＳＲ９００９作用后的細(xì)胞中??ＡＴＧ５的表達(dá)被顯著抑制（圖２－２?Ｃ）。結(jié)合兩株小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的實驗結(jié)果可??以得出核心自噬基因ＡＴＧ５是ＲＥＶ－ＥＲＢａ蛋白的下游靶基因。??Ａ??ＣｎｔｗｒＭｏｎｎｒ?ｔ?Ｐｅａｋ?Ｃｈｒｏｍｏ？ｏｍ＊?１１??Ｐ＊＊ｋ？?Ｐ？？ｋ？?■??ＮＲ１０１??‘‘ＩＩ＊?．ｘ．?－ｉ?ｋ．?．?Ｌ?ｉ?Ａ?．ｉｉ．＿?—?ｋｔ．?＿?＿?－?．?－?．?Ａ?．?ＮＲ１Ｄ１?瀛?＞？?－?ｌＡＡＡ?Ｊｋｉ?．?ｔｉ??ｌｏｐｕ，?．?．?．?．?，ｎｐｕ，?ｔ?ｉ?■?？ｍ?ｉ?ｎ?（ｉ?？？？?？ｉ?ａｉ?


本文編號：3042809