目的:乳腺癌是21世紀女性惡性腫瘤中高發(fā)的一種,探究乳腺癌的病因以發(fā)生發(fā)展的分子機制并確定早期診斷乳腺癌的標記物和靶向藥物將是解決這一難題的關鍵所在。腫瘤壞死因子受體相關因子（tumor necrosis factor receptor associated factors,TRAFs）是重要的胞漿銜接蛋白,其家族包含7個成員,參與調節(jié)NF-κB、JNK等多種信號傳導通路。TRAF2作為TRAFs家族的經(jīng)典成員之一,在多種腫瘤中高表達。我們發(fā)現(xiàn)TRAF2促進p70s6k信號通路的活化,乳腺癌細胞系MCF-7中上調TRAF2表達可激活NF-κB激活核轉位從而抑制乳腺癌細胞的凋亡。Akt又稱蛋白激酶B（protein kinase B,PKB）,作為腫瘤細胞內重要的信號轉導通路,調控細胞生長與增殖,其異常的持續(xù)性活化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切。研究發(fā)現(xiàn)Lys63連接的泛素化修飾,能夠促進Akt活化。TRAF家族成員TRAF4具有E3泛素連接酶活性,能夠介導Akt發(fā)生泛素化活化。我們研究發(fā)現(xiàn)TRAF2可以與TRAF4結合并調控TRAF4的核漿分布,于是我們猜測,TRAF2是否可以通過調控TR... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

TRAF2和Akt在乳腺癌組織和細胞系中高表達

圖 2. TRAF2 通過 Akt 信號通路促進乳腺癌細胞遷移侵襲，抑制凋亡(A)流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，轉染 TRAF2 后，MCF-7 細胞的凋亡數(shù)降低；下調 Akt 表達后，細胞的凋亡率顯著增加，共轉染 TRAF2 和 si-Akt 后顯著抑制了 TRAF2 上調所引起的 MCF-7 細胞凋亡細胞數(shù)的增加。(BC)劃痕實驗和 Transwell 實驗顯示了 Akt 在 TRAF2 促進 MCF-7 細胞的遷移侵襲能力中起到重要作用。

圖 1. TRAF2 激活 Akt 信號通路(A) TRAF2 促進 Akt 的磷酸化。Western blot 結果顯示，在 MCF-7 細胞中上調 TRAF2 表達，Akt 磷酸化水平明顯增加。(B)免疫熒光檢測顯示：在 MCF-7 細胞中轉染 TRAF2 后 p-Akt 的熒光強度增強，Bars: 20μm。(C) EGF 誘導 Akt 的磷酸化活化。Western blot 顯示，MCF-7 細胞經(jīng)EGF(50ng/ml)處理后，在不同時間點收細胞，Akt 磷酸化水平隨著時間梯度表達上調。(DE)Western blot 顯示，在 MCF-7 和 BT-549 細胞中，經(jīng) EGF(50ng/ml)不同時間點的處理后，上調TRAF2 表達可以增強 Akt 磷酸化水平的表達。 (FG) Western blot 顯示，在 MCF-7 和 BT-549細胞中，經(jīng) EGF(50ng/ml)不同時間點的處理后，下調 TRAF2 表達可以降低 Akt 磷酸化水平的表達。3.2 TRAF2 上調乳腺癌細胞中 AKT 泛素化水平接下來我們進一步檢測，TRAF2 是否可以調控 Akt 的泛素化水平。于是我們通過泛素化實驗，在乳腺癌 MCF-7 細胞中上調 TRAF2 的表達，發(fā)現(xiàn) AKT 的泛素化

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3027149