目的:乳腺癌是21世紀(jì)女性惡性腫瘤中高發(fā)的一種,探究乳腺癌的病因以發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制并確定早期診斷乳腺癌的標(biāo)記物和靶向藥物將是解決這一難題的關(guān)鍵所在。腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子（tumor necrosis factor receptor associated factors,TRAFs）是重要的胞漿銜接蛋白,其家族包含7個(gè)成員,參與調(diào)節(jié)NF-κB、JNK等多種信號(hào)傳導(dǎo)通路。TRAF2作為TRAFs家族的經(jīng)典成員之一,在多種腫瘤中高表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)TRAF2促進(jìn)p70s6k信號(hào)通路的活化,乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中上調(diào)TRAF2表達(dá)可激活NF-κB激活核轉(zhuǎn)位從而抑制乳腺癌細(xì)胞的凋亡。Akt又稱蛋白激酶B（protein kinase B,PKB）,作為腫瘤細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,調(diào)控細(xì)胞生長與增殖,其異常的持續(xù)性活化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。研究發(fā)現(xiàn)Lys63連接的泛素化修飾,能夠促進(jìn)Akt活化。TRAF家族成員TRAF4具有E3泛素連接酶活性,能夠介導(dǎo)Akt發(fā)生泛素化活化。我們研究發(fā)現(xiàn)TRAF2可以與TRAF4結(jié)合并調(diào)控TRAF4的核漿分布,于是我們猜測(cè),TRAF2是否可以通過調(diào)控TR... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

TRAF2和Akt在乳腺癌組織和細(xì)胞系中高表達(dá)

圖 2. TRAF2 通過 Akt 信號(hào)通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移侵襲，抑制凋亡(A)流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染 TRAF2 后，MCF-7 細(xì)胞的凋亡數(shù)降低；下調(diào) Akt 表達(dá)后，細(xì)胞的凋亡率顯著增加，共轉(zhuǎn)染 TRAF2 和 si-Akt 后顯著抑制了 TRAF2 上調(diào)所引起的 MCF-7 細(xì)胞凋亡細(xì)胞數(shù)的增加。(BC)劃痕實(shí)驗(yàn)和 Transwell 實(shí)驗(yàn)顯示了 Akt 在 TRAF2 促進(jìn) MCF-7 細(xì)胞的遷移侵襲能力中起到重要作用。

圖 1. TRAF2 激活 Akt 信號(hào)通路(A) TRAF2 促進(jìn) Akt 的磷酸化。Western blot 結(jié)果顯示，在 MCF-7 細(xì)胞中上調(diào) TRAF2 表達(dá)，Akt 磷酸化水平明顯增加。(B)免疫熒光檢測(cè)顯示：在 MCF-7 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 TRAF2 后 p-Akt 的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，Bars: 20μm。(C) EGF 誘導(dǎo) Akt 的磷酸化活化。Western blot 顯示，MCF-7 細(xì)胞經(jīng)EGF(50ng/ml)處理后，在不同時(shí)間點(diǎn)收細(xì)胞，Akt 磷酸化水平隨著時(shí)間梯度表達(dá)上調(diào)。(DE)Western blot 顯示，在 MCF-7 和 BT-549 細(xì)胞中，經(jīng) EGF(50ng/ml)不同時(shí)間點(diǎn)的處理后，上調(diào)TRAF2 表達(dá)可以增強(qiáng) Akt 磷酸化水平的表達(dá)。 (FG) Western blot 顯示，在 MCF-7 和 BT-549細(xì)胞中，經(jīng) EGF(50ng/ml)不同時(shí)間點(diǎn)的處理后，下調(diào) TRAF2 表達(dá)可以降低 Akt 磷酸化水平的表達(dá)。3.2 TRAF2 上調(diào)乳腺癌細(xì)胞中 AKT 泛素化水平接下來我們進(jìn)一步檢測(cè)，TRAF2 是否可以調(diào)控 Akt 的泛素化水平。于是我們通過泛素化實(shí)驗(yàn)，在乳腺癌 MCF-7 細(xì)胞中上調(diào) TRAF2 的表達(dá)，發(fā)現(xiàn) AKT 的泛素化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3027149